HR8332 酸性磷酸酶染色试剂盒

本产品以萘酚AS-BI为底物，在酸性pH下被酸性磷酸酶水解释放出磷酸和萘酚，萘酚与重氮盐偶联生成有色产物，定位于细胞质中。多用于新鲜血涂片、细胞涂片、冰冻切片等。酸性磷酸酶（ACP）分布极广泛，遍布各种组织，主要存在于细胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶。溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内。各种动物中

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储存条件：

试剂A、B2 2-8℃避光保存，试剂B1 -20℃避光保存，试剂B3、C室温避光保存。有效期1年。

试剂盒以外自备试剂耗材和仪器：

● 显微镜 ● 恒温箱 ● 移液器 ● 载玻片 ● 纯水 ● PBS

使用注意事项：

● 螺旋盖微量管装试剂在开盖前请短暂离心,将盖和管内壁上液体离心至管底,避免开盖时试剂损失。

● 血涂片应厚薄均匀，以免影响染色效果。

● 涂片染色中，请勿先去除染液或直接对涂片用力冲洗。不能先倒掉染液，以免染料沉着涂片上。

● ACP孵育液易失效。本法宜用皮肤穿刺血涂片，晾干后应及时染色。

● GBC染色液尽量2-8℃保存，避免-20℃保存，以免潮解。

● 对冰冻切片染色时，应减少切片在室温暴露的时间。

● 样本需新鲜，取材后应立即处理，否则会影响酶的活性。

● 组织固定需在4℃冰箱进行，时间不宜超过24h，否则酶活性会减弱或消失。

● 一般不建议用石蜡切片。如果需要用石蜡切片，组织在石蜡包埋时，温度不宜高于56℃。应使用熔点为52-54℃的石蜡进行浸蜡，浸蜡时间要短，否则酶活性会减弱或消失。

● 不纯的二甲苯会分解黑色沉淀，宜选用AR及以上的二甲苯。

● 以下方法仅供参考，根据实际样本和参考文献情况进行调整。

使用方法：

1、试剂配制：

使用前按试剂B1:B2:B3=10:5:90混合均匀，即为ACP染色孵育液工作液B，现配现用。

2、按常规方法制备血涂片，待涂片自然干燥。

【注】：

● 推片方法：取新鲜全血或骨髓细胞液滴3μL左右置载玻片上，将推玻片保持与载玻片30°角，置于血滴正前方，稍往后移与血滴接触，即可见血液沿推片下缘散开，再均匀沿载玻片平面平稳向前滑动，至血液铺完血膜为止。

● 涂片时不要太厚也不要太薄。太厚血细胞重叠并易皱，太薄时不易找到白细胞。

● 用蜡笔在血膜两头划线，平放于染色架上。血膜要干透后才能染色，否则染色时血膜易脱落。

3、滴加适量固定液A，使其盖满涂片，4℃固定30秒-3分钟。一般30-60秒即可。

【注】：

● 试剂用量不能太少，以防很快蒸发引起染液沉淀。

4、水洗30-60秒。稍微晾干。

【注】：

● 注意不要过分干燥。

5、涂片入ACP染色孵育液工作液B，37℃温箱避光浸染45-60分钟。

【注】：

● 最好在孵育盒中进行，防止染色液挥发变干。

● 太干后染色效果会变差。

6、用水从玻片一端轻轻冲洗1分钟，在玻片未完全干前进行复染。可用苏木素复染3-5分钟。

【注】：

● 染色过深或过浅应调整染色时间。

7、水洗、晾干、镜检。

冰冻切片参考步骤：

1、回温：将保存在-20℃冰箱中的冰冻切片放置到切片架上回温5-10分钟。可以放在37℃孵箱中进行回温，或者将切片架放置在一个小盒子中，将盒子置于37℃水浴锅中进行回温。

2、水合：将回温好的切片，水中浸泡1-2分钟。

3、固定：让切片在空气中自然晾干，再放入本试剂盒中的固定液中固定1-3分钟，水洗30-60秒。

4、孵育：水洗后还未完全干前放入ACP染色孵育液工作液B，37℃温箱避光浸染45-60分钟。太干后染色效果会变差。

5、复染：孵育完后，取出水洗1分钟，在玻片未完全干前进行复染。可用苏木素复染5-10分钟。

6、水洗、晾干、镜检。

结果分析：

阳性颗粒    紫红色；

细胞核      蓝色。

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