双缩脲法蛋白含量检测试剂盒

双缩脲法蛋白含量检测试剂盒：样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。

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双缩脲法蛋白质含量检测试剂盒说明书

产品货号：R22025

产品规格：100管/96样

双缩脲法蛋白含量检测试剂盒产品简介：

  样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。   强碱性溶液中，双缩脲与 CuSO4形成紫色络合物；紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与 蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。该方法测定范围为 1~10mg 蛋白质，适用于 蛋白质浓度高的样品，尤其是动物材料。

自备仪器和用品:

1. 可见分光光度计/酶标仪

2. 移液器

3. 微量玻璃比色皿/96 孔板

4. 蒸馏水

试剂组成和配制：

试剂一：液体 20ml×1 瓶，4℃保存。

标准品：液体 1ml×1 支，5 mg/ml，-20℃保存。

样品中可溶性蛋白质提取:

1. 液体样品：澄清无色液体样品可以直接测定。

2. 组织样品：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 提取液（自备，根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水））冰浴匀浆，10000rpm，4℃离 心 10min，取上清，即待测液。（动物样品常常需要稀释）

3. 细菌、真菌：按照细胞数量（10 4个）：提取液体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞 加入 1ml 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然 后 8000rpm，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

测定步骤:

1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上，调节波长到 540 nm，蒸馏水调零。

2. 空白管：取 0.5 mlEP 管，加入 40ul蒸馏水，200ul试剂一，混匀后室温静置 15 min，取 200 ul于微量玻璃比色皿/96 孔板，540nm 比色，记为 A1 空白管。

3. 标准管：取 0.5 mlEP 管，加入 40ul标准液，200ul试剂一，混匀后室温静置 15 min，取 200 ul于微量玻璃比色皿/96 孔板，540nm 比色，记为 A2 标准管。

4. 测定管：取 0.5 mlEP 管，加入 40ul待测液，200ul试剂一，混匀后室温静置 15 min，取 200 ul于微量玻璃比色皿/96 孔板，540nm 比色，记为 A3 测定管。

样品中蛋白质浓度计算：

1、按液体体积计算：

蛋白质（mg/ml）= C 标准管÷(A 标准管－A 空白管)×(A 测定管－A 空白管) =5÷(A 标准管－A 空白管)×(A 测定管－A 空白管)

2、按样本鲜重计算：

蛋白质（mg/g 鲜重）= C 标准管÷(A 标准管－A 空白管)×(A 测定管－A 空白管) × V 样总÷W             =5÷(A 标准管－A 空白管)×(A 测定管－A 空白管) ÷W

3、按细胞数量计算：

蛋白质（mg/10 4 cell）= C 标准管÷(A 标准管－A 空白管)×(A 测定管－A 空白管) × V 样总                ÷500 =0.01÷(A 标准管－A 空白管)×(A 测定管－A 空白管)

C 标准管：5mg/ml；V 样总：样本总体积，1ml；W：样本鲜重，g；500：细胞总数，500 万。

注意事项：

1. 样品蛋白浓度须在 1~10mg/ml 范围内，低于 1mg/ml 不能用此法，高于 10mg/ml 须做相应稀释。因 此测定前用 1~2 个样做预实验，确保蛋白浓度在 1~10mg/ml 范围内。

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