HR0389 蛋白脱盐柱

蛋白脱盐柱的品牌是百奥莱博，是优质的蛋白质研究产品，本制品用于生化实验研究等领域，我公司专注于蛋白质研究产品的研发、生产和供应，为您提供的蛋白脱盐柱质量可靠，批间差小，且价格公道，热切盼望您选购我们的产品。

北京百奥莱博科技有限公司是一家专业的生物试剂销售公司。公司主要经营血清、抗原、抗体等生物试剂产品，可以为您提供专业的技术服务，以优良的价格、优质的服务、优先的理念，满足客户的各方面的需求，与国内多家企业、单位建立了良好的长期合作关系，拥有较好的企业信誉和品牌形象。 主营产品:血清、抗体、抗原、核酸提取、核酸纯化等生化试剂

特别提示：包括蛋白脱盐柱在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：蛋白脱盐柱
产品货号：HR0389
产品规格：1个

蛋白脱盐柱是一种方便的蛋白脱盐工具，只需要离心操作即可以用来对蛋白质液体样本进行脱盐，还可以用于蛋白质、抗原、抗体、酶和微生物的浓缩纯化。也可以用来对蛋白质样品中的盐分、糖类、核酸、非水溶剂及其他一些低分子量物质进行去除和缓冲液置换。还可以用来分离蛋白质标记时未结合上的游离标记物。
蛋白脱盐柱使用蛋白质低吸附性的再生纤维素过滤膜制造，具有快速、方便、回收率高的特点，可替代并优于透析法脱盐及蛋白沉淀法蛋白浓缩。
蛋白脱盐柱有多种规格可供选择。
可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、液体、土壤等不同样本的蛋白提取试剂盒，包含用于非双向电泳和双向电泳等不同下游应用的试剂盒以及含去垢剂成分和不含去垢剂成分的蛋白提取试剂盒，总计300多种蛋白提取试剂盒可供选择。
还可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体等不同细胞器的提取试剂盒。

储存条件：室温避光保存。
用过的脱盐管要保持过滤膜湿润，不能干掉。
有效期：一年。
使用前请仔细阅读产品说明书
使用限制：本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：我司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。
使用安全： 使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。
应用场景：
1．脱盐和缓冲液更换；
2．组织培养提取物或细胞裂解液中大分子组分的纯化；
3．生物样品浓缩：包括各种抗原、抗体、酶、核酸或微生物；
4．对稀释或从柱洗脱液预先纯化的蛋白质进行浓缩。

产品特点：
1．高回收率 >90%；
2．垂直结构的膜减少了浓差化，加快离心速度，快达 5分钟；
3．热密封膜将下游溶出物污染可能性降到zuì低；
4． 完整性检测确保性能可靠；
5．透明外壳和体积刻度方便样品察看；
6．直接吸取样品减少处理步骤；
7．高浓缩倍数：高达80–100倍
试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：
仪器
●离心机。可容纳1.5ml微量离心管的固定角度转子离心机。
● 振荡器 ● 涡旋混匀器 ● 移液器 ●冰箱、冰盒
耗材
●离心管 ● 吸头
试剂
● 纯水

使用方法：
清洗脱盐柱：
1．用缓冲液或纯水进行预清洗。也可先用0.1 M NaOH 清洗，再用缓冲液或纯水进行二次清洗。
2．离心管中的过滤膜一旦润湿后应避免变干。如果在预清洗后不是立即使用，则让液体保留在滤膜上，直到使用。
使用注意事项：
● 不同的蛋白脱盐的速度不同，有的需要长时间离心，有的则很快就好。和蛋白样品纯度，所用buffer 类型，蛋白的浓度有关系。离心时要先短些时间，观察一下脱盐速度；
● 如果需要多次重复使用，离心速度不要太高；
●重复使用时要仔细检查管壁上有没有裂纹；
● 脱盐柱浓缩蛋白会有蛋白损失，样品体积大就分批离心，尽可能不要离心时间太长
● 样品里的杂质如果可能尽量在离心前去除一些。
●分子量小于5kD的溶质可能只有部分被截留。2kD的样品截留率大约只有40%。过滤膜的截留率取决于溶质的分子大小和形状。目的蛋白小于5kD的样品不要使用脱盐柱脱盐。
● 浓缩液的样本回收率低可能是由于吸附损失、过度浓缩，或样本穿过滤膜而造成的。
● 吸附损失取决于溶质浓度、疏水性、与过滤脱盐管表面接触的温度和时间、样本成分及pH。为了zuì大限度降低损失，离心后请立即回收脱盐后的样本。
● 如果样本的起始浓度很高，请监控离心过程，以免样本过度浓缩。过度浓缩会导致沉淀，这也可能带来样本损失。
● 样本有可能穿过滤膜，务必将每次的滤过液一直保留到脱盐的样品分析测试完成。
● 样品蛋白zuì低起始浓度为25μg/ml。
● 加蛋白液或Buffer 到脱盐管时，可以用蓝枪头；但从脱盐管底吸取脱盐好的目的蛋白时，必须用黄枪头；用枪头伸入脱盐管中时，必须防止碰到滤膜，以免戳破滤膜。
脱盐使用方法：
操作步骤：
1．将内管插入所提供的一个微量离心管中。
2．向内管中加入不超过500μl的样本，并盖上盖子。
3．将盖好盖子的脱盐管放入离心转子中，让盖子的连接带朝着转子的中央；用一个类似的离心管平衡。
4．以2000-10000×g离心约10-30分钟。
【注】：
● 务必将滤过液一直保留到脱盐的样品分析测试完成。
● 影响流速的因素包括样本浓度、起始体积、溶质的化学性质、相对离心力、离心转子的角度、滤膜类型以及温度。500μl 样本的典型离心时间大约是10 至30分钟。尽管大部分样本在离心开始后的前5 至10分钟发生过滤，但在离心10 至30分钟后才能达到zuì低的浓缩液体积(15-20μl)。
5．离心结束后将整个脱盐管从离心机中取出，取出内管。
6．为了回收脱盐后的溶质，将内管倒过来插在另一个干净的微量离心管中。放在离心机中，让打开的盖子朝着转子的中央；用一个类似的离心管进行平衡。以1,000×g离心2分钟，使脱盐后的样本从脱盐内管转移到收集管中。滤液可以保存在收集管中。
【注】：
● 要达到理想的回收效果，请尽早进行倒置离心。
● 也可不倒置离心，直接用移液器直接吸出内管中的样品。
脱盐使用方法：

使用注意事项：
● 盐分通过滤膜的过程不依赖样品的浓度和体积，用过滤的方法来脱盐并不改变缓冲液的组成，比如说，含有500mM 盐分的溶液在次离心后它的剩余液体盐浓度并不发生改变，依然是500mM。再往脱盐管中剩余溶液中加入水或无盐缓冲液，再次离心，则会降低溶液中的盐浓度。
● 这个过程我们将它称为等体积过滤，反复多次地操作，可以使溶液盐分降到zuì低。
● 如果我们想将样品用不同组份缓冲液溶解，则我们可以使用等体积过滤达到目的。样品脱盐后，然后加入目的缓冲液，再进行反复的稀释和脱盐。
操作步骤：
1．把样品置于过滤装置的储液管中；
2．如果样品体积小于过滤装置的zuì大体积，则可以把它稀释到zuì大体积后再离心，这有助于更有效地除去盐分；
3．在特定的离心力下和推荐的时间进行离心；
4．将滤过液从滤管中取出，放置一旁；
5．加入水或缓冲液使样品体积达到0.5ml；
6．再次离心；
7．取出滤过液，放置一旁；
8．回收浓缩的已脱盐样品。
【注】：
● 请将两次的滤过液一直保留到脱盐的样品分析测试完成。
清洗和保存：
1．使用后用水冲洗干净；
2．内管加入超纯水500μl，5000g离心5分钟；
3．净内管中的水，加入500μl 0.1M NaOH，5000g离心20分钟；
4．用0.1M NaOH 浸泡24小时；
5．用水冲洗干净；
6．用无菌水浸泡2-8℃保存。
7．外管用自来水洗净后，用超纯水冲洗干净，晾干。
【注】：
● 1个月不用的话，直接用100mM的NaOH 保存！更长时间的话加0.02%的叠氮钠。
● 再次使用前，用纯水充分冲洗干净，然后在用样品缓冲液平衡。
常见问题分析：
●蛋白脱盐柱会损失蛋白吗？
分子量小于3000 Da的蛋白质或多肽样品会穿透过滤膜，不适合用本脱盐柱进行脱盐。3000 -6000Da的蛋白质会有少量损失。6000Da以上的蛋白质损失很小。
●膜会因为离心时间过长而变干么？
不会，因为脱盐柱有死体积，总会有溶液残留在滤管中。死体积大约10-20μl。
●可以重复使用脱盐柱么？
可以重复使用。如果使用、清洗、保存得当，可以反复使用多次。但是多次重复使用后过滤膜有破损风险，注意使用过程中尽量避免尖锐物品戳到膜。离心力不要过大。
●蛋白在脱盐时出现了沉淀，如何改进？
蛋白如果脱盐过快或者过度浓缩都有可能引起蛋白沉淀。建议蛋白脱盐后的zuì终浓度不超过20mg/ml。对于对脱盐速度敏感而容易沉淀的蛋白，建议的改进方法是：
1)离心力降低30%-50%
2)在脱盐过程中取出脱盐管，用枪头反复吹吸几次。
● 脱盐后发现浓缩液中没有目的蛋白，可能的原因有哪些？
脱盐管的蛋白zuì低起始浓度为25μg/ml。请确保的样本的起始浓度大于这个浓度。
如果问题仍然出现，请不要丢弃样本滤过液以便用于分析可能的原因：
1)如果目的样本在滤过液中，那么请排查：
a)使用的离心力是否是在限定范围内？如果使用的是rpm，请换算成相应的g离心力，具体换算方法请垂询。
b)离心机zuì近是否有校准过？
c)是否次尝试这个蛋白？如果能确保用同样的脱盐管对其它蛋白成功操作的话，那么有可能是这个目的蛋白的原因。有时蛋白会因其本身的一些特性(构象差异)而影响脱盐效果。
2)如果目的样本也不在滤过液中，那么：
a)蛋白样本起始浓度是否大于25μg/mL？
b)用来确定样本浓度的方法是什么？是否可信？
c)目的蛋白是不是沉淀了？
●有时候用蛋白脱盐离心管连水都离不下来，可能是什么原因？
如果出现这种情况，可能时过滤膜的孔被堵住。请先用0.1M NaOH 清洗再离心。
zuì后用缓冲液或纯水再次清洗后甩干。清洗后的滤膜应立即使用，如暂时不用，请保持润湿状态，避免重新干燥。
● 说明书中推荐在室温下进行离心，考虑到蛋白的稳定性，是否可以在4℃进行离心？
可以，但是低温会增加蛋白样品的粘性，导致流速减慢，建议可将离心时间延长。
●可以用于核苷酸纯化与浓缩么？
可以
● 脱盐柱可以用酒精消毒灭菌么？
脱盐柱与70%乙醇是兼容的。
● 是否可以用于高压灭菌？
不可以，脱盐柱都是采用热封设计，不可以用高压高温灭菌。
● 是否无热源？
均非无热源的
● 如何对蛋白脱盐管进行去除内毒素的处理？
提供的脱盐管是没有经过去内毒素处理的，同时由于内毒素通常以多聚体的形式存在，大小在10-1000KD 之间不等，在脱盐的过程中是无法去除的。可在实验前通过先用0.5M NaOH 预清洗，随后用纯水/缓冲液buffer 清洗的步骤去除大部分内毒素。
● 是否不含RNA酶？
我们不保证脱盐柱不包含 RNA酶，如果需要处理无Rnase 样品，建议您可以用0.1% DEPC在 37℃浸泡 2小时，以完全灭活 RNA酶。残留的DEPC可以用无酶超纯水洗涤除去。
● 没有液流流出，为什么？
可能是溶液比较粘稠或浓度太高；
●蛋白柱去除去垢剂吗？
去垢剂因其独特的性质，当浓度大于临界微团浓度(Critical Micelle Concentration,CMC)时，去垢剂分子会聚集形成微团而改变分子构象，这有可能会影响去污剂的去除效果。小于CMC 值时可以去除。
● 如何判断脱盐管已经失效？
在正常使用下，滤膜没有被戳破时，脱盐蛋白液中不含有蛋白或量很低(包括目的蛋白)，而次的滤下液中含有目的蛋白，则说明滤膜失效，需要换新的脱盐管。

根据您的关注的蛋白脱盐柱，蛋白脱盐柱，HR0389，百奥莱博，，，您可能还对以下产品有需求：



名称：包涵体微量纯化试剂盒
货号：BTN90508
规格：20次
包涵体是指超表达的蛋白在细胞胞浆内(如果超表达的是胞浆蛋白)或膜间内(如果超表达的是分泌蛋白)凝集形成的无活性的固体颗粒。包涵体形成的主要原因是在重组蛋白的表达过程中缺乏某些蛋白折叠辅助因子，或环境不适导致无法形成正确的蛋白质次级键。由于包涵体主要由超表达的重组蛋白质组成，因此分离纯化包涵体是分离纯化具有活性的重组蛋白的步。本产品就是用于快速的提取高质量的包涵体。

产品特点：
1．操作简单快速，整个过程只要三十分钟左右。
2．微量纯化，可以在1.5mL离心管中完成。
3．能有效去除包涵体中的细胞壁和细胞膜等非重组蛋白成份，使重组蛋白所占比重达到60%以上。
4．A型用于超声法裂菌，B型用于酶法裂菌。
5．可以选择盐酸胍和尿素两种蛋白溶解方式。
6．得到的包涵体溶解液可以用于重折叠、SDS-PAGE或其他纯化处理。

试剂盒组成：

成分	20T(A型)	20T(B型)
溶液A	5ml	5ml
溶液B	50ml	50ml
包涵体溶解液	5ml	5ml
尿素	5g	5g
溶菌酶	无	600mg
Benzonase(1U/μL)	无	20μl

储存条件：常温运输和保存(B型的溶菌酶和Benzonase 需要低温运输，-20℃保存)，有效期一年。

使用方法：

一、超声法裂菌(只适用于A型)
1．在蛋白诱导期结束时，转移1.5mL菌液到一个干净的塑料离心管中。zuì好同时处理不加诱导物的细菌做对照样。
2．12000rpm室温离心1分钟，小心弃上清。沉淀(约10mg)放冰上待用或放-80℃保存。
3．加入250μL 冰浴的溶液A，冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，但裂解物必须不粘稠，否则不容易沉淀包涵体。
4．直接进入第14步。

二、酶法裂菌(只适用于B型)
5．将600mg 溶菌酶全部加入到5mL溶液A中溶解，然后根据每次的需要量(一次微量提取需要250μl)分成小份放-20℃待用。每次只取用一管。
6．包涵体中的重组蛋白一般比溶解状态中的蛋白质更能够抵抗微量内源性蛋白水解酶的降解，如果实验发现得到的重组蛋白确有降解，则需要在溶液A中新鲜加入自备的蛋白酶抑制剂混合物(BTN80808)。
7．在蛋白诱导期结束时，转移1.5mL菌液到一个干净的塑料离心管中。zuì好同时处理不加诱导物的细菌做对照样。
8．12000rpm室温离心1分钟，小心弃上清。
9．加入250μL含溶菌酶的溶液A重悬细胞。
10．室温放置10-20分钟裂解细菌，其间可以用手轻弹离心管混匀。
11．-20℃冷冻至凝固，一定要凝固到细菌溶液变成固体为止。
12．室温水浴解冻。如果裂解充分，细菌释放出的DNA 将使裂解物十分粘稠。如果不粘稠，说明裂解不充分，需要重复冻融步，否则完整细菌将和包涵体一起沉淀，影响包涵体的纯度。zuì好在显微镜下检查细菌是否充分裂解。
13．加入1μL Benzonase(1U/μL)，脱色摇床上摇晃直到裂解液不再粘稠，一般需要30分钟左右，否则还需要延长保温时间。
14．12000rpm 4℃离心5分钟，留存上清作为SDS-PAGE 对照样品一。
15．将沉淀(包涵体)悬浮在1mL的溶液B中，轻柔混匀后室温放置5分钟。
16．12000rpm 4℃离心10分钟，留存上清作包涵体洗涤的对照样品二。
17．将沉淀(包涵体)悬浮在1mL的溶液B中，轻柔混匀后室温放置5分钟。
18．12000rpm 4℃离心10分钟，留存上清作包涵体洗涤的对照样品三。本产品提供的溶液B足够两次洗涤(两次洗涤一般可得到足够纯净的包涵体)。如果需要更多洗涤，用户需要单独购买包涵体洗涤液(溶液B)
19．沉淀为纯化的包涵体，可以长期放置在冰箱待用或直接用于包涵体溶解。

三、包涵体的溶解：
20.在包涵体沉淀中加入250μL包涵体溶解液，用枪头充分吹打后漩涡震荡室温放置1小时使蛋白质充分溶解。注意：包涵体溶解液含6M 盐酸胍，溶解蛋白能力强于含8M尿素的溶解液，但SDS-PAGE时不能直接上样。客户也可以用本试剂盒提供的尿素干粉自配8-10 M 尿素的溶液(尿素溶液不稳定，所以不能长期放置)溶解包涵体，得到的溶解液可以直接用于SDS-PAGE或后续纯化。但其溶解能力弱于盐酸胍。
21. 20000g 4℃离心20分钟，小心收集上清，保留不溶性沉淀(未能溶解的包涵体)。SDS-PAGE 检查是否大部分重组蛋白都在上清中。如果没有，说明包涵体没有完全溶解，需要用适当增加包涵体溶解液的用量。
22. 所得蛋白质溶液可以用于复性等试验。用户可本公司购买包涵体复性套装。

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