特别提示:包括变性蛋白预制胶(10%)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:变性蛋白预制胶(10%)
产品货号:QN1286
产品规格:10块
本预制胶是百奥莱博公司开发的高性能低成本聚丙烯酰胺预制凝胶。预制胶将凝胶事先配制好,使用者拿来即可上样进行电泳,减去了用户自配凝胶的麻烦,节约了大量的时间。
本预制胶默认送buffer
本预制胶具有如下特点:
★ 特制凝胶和缓冲液配方,分辨率高,条带清晰,电泳效果佳
★ 保存期长,4℃储存达到18个月胶夹打开为轻松,无需起撬工具
★ 兼容目前市场各种电泳槽, 如BIORAD,天能和君意东方等
★ 可用于SDS变性及非变性电泳
★ 10%, 12%, 15%及4-15%梯度等多种不同浓度供选择;1.5mm胶厚度;
★ 电泳时间短,在150V电压下, 电泳40-50分钟即可完成
★ 出售时附送足量的电泳缓冲液。
★ 玻璃电泳板蛋白吸附率低,电泳效果更好。
本预制胶参数:
★ 胶板尺寸:10.0×8.5×0.45cm
★ 凝胶尺寸:8.0×7.4×0.15cm
★ 浓度:10%
★ 分离范围:200-6.5KDa
★ 孔数:10wells
★ 上样量:35ul
★ 应用:Western blot
储存条件:4℃,有效期18个月
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名称:BCA法蛋白定量试剂盒
货号:BTN80815
规格:500次
本产品是基于BCA法(bicincho
ninic acid,二奎啉甲酸法)蛋白检测原理开发的蛋白质浓度测定产品,BCA法跟Lowry法的步完全相同,就是在碱性条件下,蓝色的Cu2+被蛋白质还原成紫色的Cu+。此反应类似Cu2+与Biuret(NH2-CO-NH-CO-NH2,双缩尿)发生的反应,故又叫Biuret反应(Biuret反应本省就可以测定蛋白质浓度,目前仍然是医院血液蛋白定量的方法)。第二步,Cu+与BCA发生反应形成水溶性的紫色化合物,通过分光在562nm处测定紫色化合物的量就可以定量蛋白质浓度。BCA 检测灵敏度比Biuret反应高100倍左右。
产品特点:
1.对各种常见的去污剂不敏感,但对Cu的还原剂和螯合剂比较敏感。
2.比Lowry法更加简单快捷,45分钟内完成测定。
3.试剂稳定,室温可以放置两年。工作液1 天内有效。
4.线性范围在 20~2000μg/mL。如果需要范围在0.1-10ug/mL,需要选用超敏BCA。
5.zuì小测量体积为1-20μL。
6.终产物稳定,变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。
7.可以检测zuì短到双肽,而Bradford法需要一定大小的蛋白质。
8.有常规(试管)和微量(96孔板)两种检测模式。
试剂盒组成:
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成分
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规格
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溶液A
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100ml
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溶液B
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2ml
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BSA标准品(2mg/mL)
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1ml
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说明书
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1份
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储存条件:常温运输和保存(但BSA 标准品需要-20℃保存),有效期两年。
使用方法:
一:
96 板操作模式
1.取一块96孔板,行编号(编号可以根据样品数增加),并按照下表加入BSA 标准,待测样品和溶解待测样品的缓冲液(可以用水替代):
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编号
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BSA 标准(2ug/uL)
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待测样品(μL)
|
样品缓冲液(μL)
|
总体积(μL)
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蛋白含量(μg)
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|
0
|
0
|
0
|
20
|
20
|
0
|
|
1
|
1
|
0
|
19
|
20
|
2.0
|
|
2
|
2
|
0
|
18
|
20
|
4.0
|
|
3
|
4
|
0
|
16
|
20
|
8.0
|
|
4
|
8
|
0
|
12
|
20
|
16.0
|
|
5
|
12
|
0
|
8
|
20
|
24.0
|
|
6
|
16
|
0
|
4
|
20
|
32.0
|
|
7
|
20
|
0
|
0
|
20
|
40.0
|
|
样品1
|
0
|
X
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补到20
|
20
|
未知
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样品N
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0
|
Y
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补到20
|
20
|
未知
|
2.计算BCA工作液需要量:根据样品数量(包括制备标准曲线的样品的数量)和每个样品需要0.2mL BCA工作液的比例,计算所需BCA工作液的用量,然后加上10%损耗作为实际需要配制的量。例如:计算出需要5mL工作液,实际按不少于5.5mL的量配制。
3.配制BCA工作液:按50体积溶液A加1体积溶液B(50:1)的比例将二者充分混合,所得溶液即BCA工作液。比如:5mL溶液A+100μl溶液B。
注意:取用溶液A和溶液B前需要充分摇匀,溶液B非常容易形成沉淀,需要65℃加热溶解后才能使用。当把溶液B刚加入到溶液A中时,zuì初会出现淡绿色沉淀,轻微晃动沉淀即会消失,工作液zuì后成绿色,可以室温放置12 天,但需要将容器的盖子拧紧。
4.将10倍体积(即0.2mL)的BCA工作液加入到各孔中并混匀。如果用排枪加入并混匀则更好。也可把96孔板放在振荡器上振荡30秒混匀。
5.37℃放置30分钟。
6.冷至室温,10分钟内完成后续测定,否则化学反应还在继续进行,使光吸收值慢慢升高,每10分钟会升高2.5%左右。
7.在562nm下比色测定样品的光吸收。如酶标仪没有562nm的设定,可用接近的波长检测,如570nm。
8.将编号为0号的样品(对照)的读数从其余所有样品(包括0 号样品,其读数变成零)中扣除。
9.以0-7 号样品的BSA含量(μg,见上表zuì右行)为横坐标,以样品的吸光值为纵坐标,绘出BSA的标准曲线。
10.再将待测样品的吸光值(减去0 号样品的读数后的值)标在标准曲线上,其在横坐标上对应的蛋白含量(μg)就是待测样品中的蛋白质含量,除以样品稀释液总体积(20μl),乘以样品稀释倍数即为样品浓度(μg/μL)。
二:
试管测定模式
1、基本操作同上,只是操作改在编号的玻璃试管中进行,同时BSA 标准品(2ug/uL)的使用量从低到高改为0、5、10、20、40、60、80、100μL,样品的总体积从20μL 改为100μL,BCA工作液的用量从每个样品0.2mL 改为2mL。
三:
注意事项
1.BCA法测定蛋白浓度时,吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。所以,如果蛋白质浓度较低,可以改在60℃孵育30分钟或更长。
2.待测样品浓度在20~2000 微克/毫升浓度范围内有较好的线性关系。
3.在一定浓度范围内BCA法测定蛋白浓度不受下列化学物质的影响:
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名称
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在此浓度下不受影响
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Ammonium Sulfate
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1.5 M
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Brij-35
|
5.0%
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CHAPS
|
5.0%
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EDTA
|
10mM
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Hepes
|
100mM
|
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Glycine,pH2.8
|
100mM
|
|
Guanidine HCl
|
4.0 M
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Tween 20、60、80
|
5.0%
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SDS
|
5.0%
|
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Sodium Acetate pH5.5
|
200mM
|
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Sodium Chloride(NaCl)
|
1.0 M
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Sucrose
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40%
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Sodium Hydroxide(NaOH)
|
0.1 M
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NP-40
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5.0%
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Triton X-100
|
5.0%
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|
Urea
|
3.0 M
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4.本方法受样品中螯合剂和还原剂的影响,所以需确保EDTA浓度不高于10mM,二硫苏糖醇不高于1mM,β-巯基乙醇不高于1mM,没有任何EGTA,否则建议使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒(BTN80815)。
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