特别提示:包括Western一抗二抗清除剂(酸性)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:Western一抗二抗清除剂(酸性)
英文名称:Antibody Stripping buffer(Acidic)
产品货号:YT074
产品规格:250ml
本品用于Western中转移了蛋白的膜的重复利用。在Western中完成了一抗二抗结合和后续的化学发光检测后,有时还需要检测tubulin、actin等表达量相对稳定的蛋白作为参照,或检测其它蛋白进行比较。通过使用一抗二抗去除液,充分去除一抗二抗,可以非常方便地重新利用使用过的膜检测其它蛋白。和重新跑一个SDS-PAGE胶相比,不仅省时省力,而且可以消除重新上样而带来的误差,使可比性更强。
使用Western一抗二抗去除液多次重复使用同一张膜,会导致蛋白信号的减弱。但是,本Western一抗二抗去除液,经过多个抗体的检测试验,通常可以重复利用膜3-5次。使用本试剂只需大约40-80分钟即可实现蛋白膜的重复使用,然后可以进行封闭等后续的Western操作。
百奥莱博的不同的Western一抗二抗去除液主要在去除结合的一抗二抗的原理方面略有不同。分别依靠去垢剂、酸性、碱性、还原剂、螯合剂、盐浓度以及一些特殊试剂等的不同组合来解除一抗二抗的结合,同时又不会导致转移到膜上的蛋白的损失。
抗体清除剂选型表:
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产品编号
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YT071
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YT072
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YT073
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YT074
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产品名称
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Western一抗二抗清除剂(强碱性)
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Western一抗二抗清除剂(弱碱性)
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Western一抗二抗清除剂(中性)
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Western一抗二抗清除剂(酸性)
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产品包装
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250ml
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250ml
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250ml
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250ml
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pH
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强碱性
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弱碱性
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中性
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酸性
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对于膜上蛋白的保留效果
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好
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好
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好
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好
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对于一抗二抗的去除效果
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好
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好
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好
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好
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去除一抗二抗所需时间
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15-20分钟
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20-30分钟
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20-30分钟
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40-80分钟
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适用膜的类型
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PVDF和NC
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PVDF和NC
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仅PVDF
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PVDF和NC
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腐蚀性
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强
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弱
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无
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弱
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用于普通的Western检测时蛋白膜上一抗二抗的去除可以任选一种去除液。如果是NC膜,即硝酸纤维素膜时,不宜选用YT071N。从时间角度考虑,强碱性、弱碱性和中性的去除液所需的时间都比较短,可以优先考虑。从价格因素考虑,强碱性的去除液zuì高。从安全性考虑,中性的去除液由于没有腐蚀性而表现出更高的安全性。弱碱性和弱酸性一抗二抗去除液的安全性次之。但只要正确操作,并进行适当防护,使用强碱性的一抗二抗去除液也是完全可行的。
对于特定的抗原和抗体,很难说哪一种Western一抗二抗去除液的效果zuì好。在遇到一抗二抗去除效果欠佳时,可以考虑适当延长一抗二抗去除液的孵育时间,同时确保孵育时的温度不低于20℃。温度过低时一抗二抗的去除效果会下降。同时也可以考虑尝试其它的一抗二抗去除液,以摸索出zuì佳的适合您实验条件的Western一抗二抗去除液。
注意事项:
1. 使用辣根过氧化物酶(HRP),任何一次封闭(blocking)都应当使用5%脱脂牛奶,如果使用碱性磷酸酯酶,任何一次封闭都应当使用酪蛋白(casein)。
2. 为取得zuì佳效果,推荐使用PVDF膜。但硝酸纤维素膜也可以使用本Western一抗二抗去除液。
3. 使用化学发光试剂进行的Western检测适用本试剂。使用非化学发光试剂进行的Western检测,例如DAB,NBT/BCIP,不适用于本试剂。
4. 本Western一抗二抗去除液有轻微腐蚀性,使用时请注意防护。
储存条件:室温,有效期一年。
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货号
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名称
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规格
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YT096
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抗荧光淬灭PVP封片液
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5ml
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YT114
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Alexa Fluor 647抗小鼠免疫荧光染色试剂盒
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>300次
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YT871
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封闭液(用PBS配置,不含去垢剂)
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100ml
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YT881
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蛋白A琼脂糖
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2ml
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ZN1910
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PBS-T(含有0.05%Tween-20)缓冲系统封闭液
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500ml
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ZN1913
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封闭蛋白PBS缓冲系统封闭液(干粉)
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1包
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ZN1845
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免疫荧光试剂盒(兔源一抗)(DyLight488)
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2ml|4ml|10ml
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关注
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名称:BCIP/NBT碱性磷酸酯酶显色试剂盒
货号:YT078
规格:共100ml
本试剂盒是一种用于免疫组化显色、Western等膜显色和诱导多功能干细胞iPS鉴定等的试剂盒。
碱性磷酸酯酶常被称作碱性磷酸酶(EC 3.1.3.1),是一类水解酶,通过水解磷酸单酯将底物分子上的磷酸基团除去,并生成磷酸根离子和自由的羟基,其去磷酸化作用的底物包括核苷酸、蛋白质和生物碱等,并在碱性条件下zuì为有效。该酶是一组同功酶的统称。常见的小牛肠碱性磷酸酶被广泛用于二抗等的标记zuì终用于蛋白和核酸等的检测,也常用于DNA或RNA 5’和3’末端的去磷酸化(去单磷酸化),特别是质粒的5’末端去磷酸化以避免质粒自连等。
BCIP/NBT是碱性磷酸酯酶的常用底物。在碱性磷酸酯酶的催化下,BCIP会被水解产生强反应性的产物,该产物会和NBT发生反应,形成不溶性的深蓝色至蓝紫色的NBT-formazan。
本试剂盒可以用于细胞或组织的碱性磷酸酯酶显色包括诱导多功能干细胞iPS的鉴定,也可以用于Western等结合有碱性磷酸酯酶的膜的显色检测。同时也可以用于细胞或组织内源性的碱性磷酸酯酶显色。
试剂盒组份:
碱性磷酸酯酶显色缓冲液————100ml
BCIP溶液(300X)————————350μl
NBT溶液(150X) ————————700μl
储存条件:4℃,有效期一年。
名称:免疫染色一抗稀释液
货号:YT088
规格:100ml
本品可以用于免疫染色时一抗的稀释和配制。使用本免疫染色一抗稀释液稀释和配制的一抗可以在4℃保存和使用不少于六个月,可以反复多次用于免疫染色,节约您宝贵的抗体。
按照每个一抗稀释10毫升计算,一个包装的免疫染色一抗稀释液可以稀释10个或10次一抗。
注意事项:为了能使抗体可以反复多次使用,建议尽量在4℃进行一抗和蛋白膜的结合反应,以减缓一抗的衰减速度。
储存条件:4℃,有效期一年。
名称:FITC抗人免疫荧光染色试剂盒
货号:YT100
规格:>300次
本试剂盒含有FITC标记的山羊抗人IgG(H+L)抗体,可以用于检测人来源的相应一抗,观察到的颜色为非常鲜艳的绿色。FITC是一种常用的绿色荧光探针。FITC的吸收峰492nm、发射峰520nm。 本试剂盒提供了含有荧光标记抗体稳定剂的免疫荧光染色二抗稀释液,可以确保荧光标记抗体稀释后在4℃可以保存长达6个月,并且在6个月内至少可以重复使用10次。本试剂盒含有抗荧光淬灭封片液,可以使荧光更加持久。本试剂盒对于六孔板内的细胞样品或常规切片,至少可以检测300个样品。
试剂盒组份:
抗人FITC————————————0.03ml
免疫荧光染色二抗稀释液—————50ml
抗荧光淬灭封片液————————15ml
注意事项:
1. 需荧光显微镜或激光共聚焦显微镜。
2. 在使用抗荧光淬灭封片液的情况下可以减缓淬灭,但仍宜尽量避光,特别是需要尽量缩短在荧光显微镜下的观察时间。
3. 荧光物质均易发生淬灭,染色后宜尽快进行荧光显微镜下的观察。如果不能及时观察可以4℃避光保存,但存放时间通常不宜超过一周,随着存放时间的延长可能会导致观察效果越来越差。
4. 免疫荧光染色效果的好坏和一抗的关系非常密切。建议选购有较多文献报道的并注明可以用于免疫荧光染色的一抗用于本实验。
5. 如果观察时发现荧光过弱,可以适当提高一抗的浓度;如果荧光还是比较弱,可以适当提高荧光标记抗体的浓度。
储存条件:-20℃,有效期一年。
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