特别提示:包括5M甜菜碱溶液(PCR级)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:5M甜菜碱溶液(PCR级)
英文名称:5M Betaine Solution(PCR Grade)
产品货号:RFT160
产品规格:5×1ml
甜菜碱,DMSO和甲酰胺有助于减少富含GC模板的二级结构和对这些模板扩增,甜菜碱的浓度通常是0.1M~3.5M,DMSO的浓度在2%~8%之间,而且10%的DMSO会使 Taq polymerase的活性降低达50%,甲酰胺通常使用浓度为1%~5%,根据我们经验,甜菜碱和DMSO联合使用的效果优于甲酰胺。
使用方法:
1、-20℃保存的甜菜碱溶液常温融化,混匀。
2、根据根据PCR反应体系,加入适量体积的5M甜菜碱溶液。
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20μl 体系
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反应体系终浓度
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10×PCR Buffer
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2μl
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1×
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5M Betaine*
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4μl
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1 M
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模板
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0.05-0.5μg
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as you wish
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上游引物 10μM
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0.5μl
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0.2μM
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下游引物 10μM
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0.5μl
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0.2μM
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dNTP10mM
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0.5μl
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200μM
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Taq
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0.5-1μl
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2.5-5 U
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灭菌水
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up to 20μl
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注:不同模板,不同片段的扩增可能需要不同浓度的甜菜碱,可以适当调节加入体积,找到适合自己反应的甜菜碱浓度。
储存条件:-20℃,有效期一年。
根据您的关注的
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本产品是我司开发的专门用于富含GC的DNA模板扩增的试剂。
产品特点:
1.,使用效果普遍好于常规的添加DMSO和甜菜碱的方法。
2.可以处理GC含量高达80%的DNA模板。
3. 操作简单,将本产品用于溶解DNA沉淀即可使用。
储存条件:常温运输及保存,有效期一年。
使用方法:
将乙醇沉淀的高GC DNA直接溶解在适量的本产品中,充分吹打均匀,然后直接将DNA加入PCR反应体系中进行PCR反应。加入的DNA溶液zuì好不要超过PCR终体积的1/10。剩余的DNA可以长期保存。
名称:即用型高保真PCR试剂盒
货号:BTN90708
规格:1.5mL
本产品是即用型的2×高保真PCR预配反应液,含有除引物、模板以外的所有PCR试剂,包括Pfu DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR 增强剂、上样染料等,特别适合于高保真PCR反应。
产品特点:
1. Pfu DNA聚合酶是使用zuì广泛的高保真酶,其保真度为普通Taq酶的10倍。
2. 使用时只需在加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应,非常方便,简化了PCR的准备工作。
3. PCR反应所必需试剂全集于一管之中,数分钟即可完成反应体系配置。由于加样过程少,有利于减少污染,降低实验误差。
4. 本产品A型含电泳染料,PCR反应液可直接上样电泳,进一步简化了操作。
5. 由于各成分的浓度和比例都经过精心优化,反应的灵敏度高,特异性强。
6.适用于基因的高保真扩增和基因定点突变等实验,得到的PCR产物可用于平末端克隆。
储存条件:低温运输,-20℃保存,保存期限为12个月。
使用方法:
将本产品与用户自备的模板,引物混合液按下列推荐使用量(30μL反应体系)加入PCR 管中即可进行PCR,反应结束后直接取5-15μL电泳检查扩增结果。如果反应体系不是30μL,各成分需要按比例增加或减少。
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试剂
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加入量
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2×高保真PCR MagicMix
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25μL
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DNA模板(自备)
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哺乳动物基因组DNA
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0.5-1μg
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酵母基因组DNA
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5-500ng
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细菌基因组DNA
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0.5-50ng
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质粒DNA
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5-500ng
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PCR回收片段
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1-100pg
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PCR引物(自备)
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10-20pmol each
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补水到
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30μL
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参考扩增条件:
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预变性
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94℃
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4min
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PCR(30个循环)
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94℃
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30s
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50℃
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30s
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68℃
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0.5kb/min
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延伸
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68℃
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10min
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注意事项:
1. 本产品的Pfu DNA聚合酶比Taq DNA聚合酶的延伸反应速率低,因此我们推荐的扩增延伸反应时间为每kb 需2 分种。
2. Pfu酶3′-5′外切酶活性可降解引物,所以强烈建议在冰上配置完成PCR反应液后,立即放入PCR 仪中进行扩增,扩增完毕后立即进行电泳检测。
3. 本产品扩增产物为平末端,不可以直接进行TA 克隆,可以使用ClionB载体(BTN51104)进行克隆。如需要进行TA克隆,建议对PCR产物纯化后,用加A 试剂盒(BTN60105)加A后再进行TA克隆。
4. 由于Pfu 无 5′到 3′外切酶的活性,所以本试剂盒不能用于实时荧光PCR。
疑难解答:
Q:为何Pfu DNA Polymerase扩增效率不如Taq DNA Polymerase?
A:一是由于Pfu DNA Polymerase 具有3′-5′的外切活性,所以在合成过程中,该酶会随时校对新添加的核苷酸是否配对,影响了合成效率;二是它能通过3′-5′的外切活性使引物部分降解,降低引物结合模板的能力,进而影响扩增效率。三是上面提到的尿嘧叮抑制作用。
Q:使用本产品时还有哪些注意事项?
A:1.引物长度和浓度一般应比常规的PCR 长和高(考虑到被Pfu DNA Polymerase的3′-5′的外切活性降解的因素);
2.zuì好在反应前加Pfu DNA Polymerase。
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