MT0080 BL21(DE3)感受态细胞

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特别提示：包括BL21(DE3)感受态细胞在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：BL21(DE3)感受态细胞
英文名称：BL21(DE3) Competent Cells
产品货号：MT0080
产品规格：100μl×10支

大肠杆菌经Ca离子处理后可摄取外源DNA(Plasmid、Phage DNA)，处于这种状态的细胞称作感受态细胞。在进行基因重组时，使用感受态细胞的转化实验应用十分广泛。制作基因文库、重组质粒体以及进行亚克隆实验时，特别是目的基因含量十分低的情况下时，使用的感受态细胞十分重要。BL21（DE3）感受态细胞主要应用于蛋白表达，使用pUC57质粒检测本感受态细胞，转化效率可达10⁵～10⁶。在-70℃下保存数月转化效率不发生明显降低。

使用方法：
1．取出感受态细胞，置于冰上5分钟，解冻。
2．向感受态细胞中加入1～20ng质粒DNA，轻弹离心管底部混匀，冰上放置30分钟。
3．置于42℃热激90s后，迅速置于冰上急冷2分钟。
4．向热激完毕的感受态细胞中，加入700μl经37℃预热的LB(或SOC)培养基(不含抗生素)，37℃振荡（225rpm）培养1小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
5．室温4000rpm离心5分钟，弃去700μl上清后，用剩余100μl培养基重悬细胞并涂布到含相应抗生素的LB琼脂平板表面。
6．将平板置于37℃培养，12～14小时后可出现菌落。

注意事项：
1．感受态细胞应保存在-70℃，不可多次冻融和放置时间过长，以避免降低感受态细胞的转化效率。
2．pUC18 plasmid标准品（0.2ng/μl），含有氨苄青霉素抗性，作为阳性对照使用，每次转化5μl，可以得到约10～100个克隆。
3．该感受态细胞属于蛋白表达专用感受态细胞，从该感受态细胞中提取质粒效果不佳。实验时不要直接转入连接产物，请先将连接产物转入0、JM109、DH5alpha等克隆感受态细胞后，提取质粒后再转入该感受态细胞。

保存条件：-70℃可保存一年。

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名称：大肠杆菌BL21-CondonPlus(DE3)-RIPL化学感受态细胞
货号：BTN140378
规格：10*100μl
本产品来源于Stratagene公司的BL21-Gold菌株，缺少Lon蛋白酶和OmpT蛋白酶，从而减少对重组蛋白的降解，补充大肠杆菌缺乏的4 种稀有密码子(AGA、AUA、CCC、CUA)对应的tRNA(argU、ileY、proL、leuW)，提高外源基因，尤其是富含AT-或GC-的真核基因在原核系统中的表达水平。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3 区(DE3 区含有T7 噬菌体RNA聚合酶)，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达，同时具有四环素，氯霉素，链霉素，壮观霉素抗性。本产品由特殊工艺制作，经pUC19质粒检测转化效率高达108cfu/μg。
菌株基因型为：F- ompT hsdS(rB-mB-)dcm+ Tetr galλ(DE3)endA Hte [argU proLCamr] [argU ileY leuW Strep/Specr]。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以100μl感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击90秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含有相应抗生素的LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意事项：
1、涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm ，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2、新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3、涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
4. 诱导时，IPTG浓度可选(0.1-2mM 均可)。
5. 为获得需要量的蛋白，zuì佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。

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