JN0081 分泌型碱性磷酸酶(SEAP)

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特别提示：包括分泌型碱性磷酸酶(SEAP)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：分泌型碱性磷酸酶(SEAP)
英文名称：Secreted alkaline phosphatase
产品货号：JN0081
产品规格：100U

  本酶为人胎盘碱性磷酸酶缺失了细胞膜结合部位的突变蛋白，热稳定性比多数细胞产生的内在碱性磷酸酶的同工酶高。SEAP（分泌型碱性磷酸酶）是今年来广泛注目的报告基因，由于其能够直接分泌到细胞外，不需要常见的报告基因检测中所需要的细胞裂解操作，可以用于同一样品中基因表达随时间变化的检测。
SEAP可以通过间硝基苯磷酸(PNPP)为底物，优点是操作简单，成本低。也可通过化学发光底物实现高灵敏度检测。可用于SEAP报告基因检测阳性对照。

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货号	名称	规格
BTN130984	DNase I溶液	1.5mL
SV0038	AluI限制性内切酶	5KU|1KU|500U
SV0110	BceAI限制性内切酶	250U|50U
SV0177	BsgI限制性内切酶	250U|50U
SV0179	BsiEI限制性内切酶	5KU|1KU
SV0208	BspDI限制性内切酶	10KU|2KU
SV0242	BssSαI限制性内切酶	1KU|200U

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名称：Taq DNA聚合酶
货号：BTN51206
规格：500U
本产品是Thermus aquaticus(水生栖热菌)的DNA聚合酶基因在E. coli中表达而得,具有以双链DNA为模板的5′→3′聚合酶活性和5′→3′外切酶活性。Taq DNA聚合酶长为832个氨基酸，分子量为94 Kd。该酶可以广泛用于PCR，RT-PCR，加尾反应等。

产品特点：
1．耐热DNA聚合活性，该酶在90℃以上几乎无DNA合成，在75～80℃时延伸率约150个核苷酸，70℃时为60个核苷酸/秒，55℃时为24个核苷酸/秒。在65～68℃并有Mn2+存在时还具有逆转录活性。
2．热稳定，在PCR混合物中95℃保温40分钟仍可保持50%的活性。
3．Mg2+离子依赖性，MgCl2浓度在2.0mM时该酶催化活性zuì高。
4．本酶无3′→5′外切活性，不具3′→5′校对功能，碱基错配机率为2.1×10^-4。

产品组成：

成分	规格
Taq DNA聚合酶(5U/μL)	20μl
10×PCR Buffer(含Mg2+)	1ml
MgCl2，25mM	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：(以λDNA为模板进行PCR扩增反应为例)

1．按下列组份配制PCR反应液。

Taq DNA聚合酶(5U/μl)	0.25μl
10×PCR Buffer(含Mg2+)	5μl
MgCl2(25mM)	根据需要补加
自备dNTP(各2.5mM)	4μl
模板DNA	见下
引物1(20μM)	1μl
引物2(20μM)	1μl
灭菌蒸馏水	Up to 50μl

注：10×PCR Buffer含15mM MgCl2(在PCR体系中的终浓度为1.5mM)，是否需要补加MgCl2根据实验决定。但一般不需要补加。
推荐50μL PCR反应体系中模板DNA推荐使用量

哺乳动物基因组DNA	0.5-1μg
酵母基因组DNA	5-500ng
细菌基因组DNA	0.5-50ng
质粒DNA	5-500pg
PCR回收片段	1-100pg

2．PCR反应条件
以λDNA为模板，扩增1kbp的DNA片段的PCR反应条件如下：

注：PCR反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定zuì佳的反应条件(温度、时间等)。

注意事项：
PCR的反应液请在冰中配制，然后置于PCR反应仪上进行PCR反应。这种冷启动法可增强PCR扩增的特异性，减少PCR过程中的非特异性反应，能得到良好的PCR结果。

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