KFS335 PCNA细胞增殖检测试剂盒

PCNA细胞增殖检测试剂盒由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品用于科研目的，我公司的PCNA细胞增殖检测试剂盒品质上佳，经过多年的开发生产，已然非常成熟，欢迎广大新老客户订购。

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特别提示：包括PCNA细胞增殖检测试剂盒(ICF/FACS法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：PCNA细胞增殖检测试剂盒(ICF/FACS法)
英文名称：PCNA cell proliferation Detection Kit
产品货号：KFS335
产品规格：20T

PCNA 细胞增殖检测试剂盒（细胞免疫荧光法/流式细胞仪检测），PCNA是细胞DNA 多聚酶的“δ”辅助蛋白，是真核细胞DNA 合成时所必需的一种酸性核蛋白。PCNA 在细胞核内合成，并储存在核内，细胞处于静止状态时，其含量很低，当细胞进入增殖周期中，其表达明显增加，故PCNA 的表达高低可反映细胞增殖的活跃程度。

操作方法
1. 在zuì适的环境下培养细胞。
2. 除去培养液，用PBS 洗一次。
3. 胰蛋白酶处理和收集细胞，离心，（注意1）保证每管细胞数在106 个。
4. 用0.3 ml PBS 轻轻的重悬细胞, 然后慢慢加入0.7 ml 预冷的乙醇。用1 ml 玻璃移液管小心的混匀。在4°C 至少1h。（注意2）
5. 沉淀细胞，完全吸去上清。
6. 用150 μl PBS/1 % BSA 洗细胞2 次。
7. 用100μl 抗体孵育液（0.5% Tween-20/1%BSA/PBS）重悬细胞，加入1ul PCNA 抗体(1μg/106 cells)，室温孵育1 小时。
8. 离心收集细胞，用150μl1% BSA-PBS 洗2 次。
9. 离心收集细胞，用50μl 抗体孵育液重悬，加1μl (1.5μg/106 cells) 羊抗鼠IgG-FITC，室温孵育30 分钟。离心收集细胞，150μl PBS/ 1 % BSA 洗2 次。
10. 用含有终浓度为10 μg/ml RNase A 和20μg/ml PI 的0.5 ml PBS（pH7.4）重悬细胞。
11. 避光使细胞在室温下孵育20min 后，离心收集细胞，150μl PBS/ 1 % BSA 洗2 次后，转移至流式检测管中重悬。
12. FACS 检测或者储存于4℃。

注意事项
1.所有的沉淀细胞步骤为2,000 rpm, 5 min。
2.可渗透化处理细胞后细胞浓度大约为106 ，样品可以4°C 储存于乙醇中到2 个星期。
3.流式细胞检测时需要设立对照试验：
只用PI 染细胞
只用羊抗小鼠IgG-FITC 染细胞
未染色的细胞组

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名称：Caspase-2活性检测试剂盒(分光光度法)
货号：SNM514
规格：100T|50T|20T

名称：细胞凋亡线粒体膜电位检测试剂盒(JC-10)
货号：KFS213
规格：10T|20T|50T|100T
本试剂盒可应用于细胞、组织或纯化的线粒体膜电位检测。大量的研究表明线粒体与细胞凋亡密切相关，其中线粒体跨膜电位（△）的破坏，被认为是细胞凋亡级联反应过程中zuì早发生的事件之一，它发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA断裂）出现之前，一旦线粒体跨膜电位崩溃，则细胞凋亡不可逆转。

本试剂盒采用JC-10 (Enhanced JC-1)一种阳离子脂质荧光染料作为检测线粒体跨膜电位指示剂。JC-100 可以选择性地进入线粒体，且由于膜电位的增加，其颜色会发生从绿色到橙色的可逆性改变。这种特性是由于JC-100 聚合物的可逆结构，在膜化条件下，它的发射光由520nm(JC-100 单体发射光)转移到570nm (J-聚合体发射光)。当在490nm 处激发时，JC-100 发生从绿色到橙绿色的可逆改变。这两种颜色都可以被流式细胞仪上装好的一般滤光器检测到，因此绿色发射光可以通过荧光通道1（FL1）进行分析，橙绿色发射光可以通过荧光通道2（FL2）进行分析。它除了有潜力用于流式细胞术，也可以用于荧光成像分析。

注意事项
1. 微量试剂取用前请离心集液。
2. JC-10 避光保存及使用。
3. 细胞培养至汇合度80-90%，收集细胞量在1×106/Test。
4. 对PH 变化过于敏感的细胞建议用胎牛血清取代Buffer 孵育染色及洗涤，或延长观测时间。
5. 流式细胞仪检测线粒体膜电位变化受到多种因素的影响，因诱导剂、细胞株类型，作用时间的不同而荧光强度比例都有不同，因此没有通用标准的补偿设门指南，因此每个试验需设阴性及阳性对照组进行荧光补偿及设门。
6. 组织需先制备单细胞悬液或提取纯化线粒体后方可进行检测，可选用我司细胞悬液制备试剂盒或线粒体提取试剂盒。

名称：MTS细胞增殖与细胞毒性检测试剂盒
货号：KFS322
规格：500T
此试剂盒是用于测定细胞增殖与毒性试验中活细胞数目的一种高灵敏度，无放射性的比色检测法。该试剂盒单溶液试剂包含一种四唑化合物[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium,内盐；MTS] 和一个电子耦合试剂( 乙硫吩嗪，PES)。PES 的化学稳定性已得到增强，这使它能与MTS 混合形成一个稳定的溶液。

检测时，只需将少量MTS 溶液直接加到检测板孔德培养基中，孵育1-4 小时，然后酶标仪读取490nm的吸光度值就可，省掉了有机溶剂的溶解步骤，简化了实验过程，实验的灵敏度比其它如MTT, XTT 高。

注意事项
1. 本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，如果待检测体系中存在较多的还原剂，例如一些抗氧化剂会干扰检测，需设法去除。
2. 如果待测溶液有还原性，测定不含细胞，但含有细胞增殖及毒性检测溶液在490 nm 处的空白吸光度。如果该吸光度很小，则可以直接加入此细胞增殖及毒性检测溶液，如果吸光度相对较大，则需要除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的200μl 培养基和10μl 细胞增殖及毒性检测溶液进行检测。
3. 用酶标仪检测前请确保孔内没有气泡，否则会干扰测定。
4. 为保证您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作方法1.96 孔板加入细胞100μL/孔（约1×104），置37℃ 5%CO2 细胞培养箱培养24 小时。2.加入适当浓度的受试化合物。3.将96 孔板在37℃，含5% CO2 空气及湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。4.向各孔中加入10μl 的MTS 细胞增殖及毒性检测溶液。5.37℃下孵育1～4 小时。
6. 酶标仪在490nm 波长处检测每孔的光密度。

结果分析
1. 细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（完全培养基加细胞增殖及毒性检测溶液，无细胞）或空白药物孔OD 值（完全培养基加受试药物的不同稀释度加细胞增殖及毒性检测溶液，无细胞），各重复孔的OD 值取均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100
2. 求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)。

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