特别提示:包括7KD透析袋(φ16mm)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:7KD透析袋(φ16mm)
产品货号:HR8150
产品规格:1卷,5M
压平宽度:25mm
根据您的关注的
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名称:SDS裂解液
货号:YT039
规格:100ml
本品是一种比较强烈的细胞组织裂解液。SDS裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、ChIP(染色质免疫共沉淀,chromatin immunoprecipitation)等。
SDS裂解液的主要成分为50mM Tris (pH8.1),1% SDS,以及sodium pyrophosphate,β-glycerophosphate,sodium orthovanadate,sodium fluoride,EDTA,leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白降解。
用SDS裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用百奥莱博的BCA蛋白浓度测定试剂盒(YT036/YT037)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
储存条件:-20℃,有效期一年。
名称:Western抗体稀释液
货号:WE0295
规格:100ml
在蛋白印迹(Western Blot , WB)实验中,一抗和二抗通常需要适当稀释使用。本公司生产的WB抗体稀释液可用于蛋白印迹时抗体的稀释和配制,稀释和配制的一抗或二抗可以在4℃保存和使用不少于1周,可以反复2-3次用于蛋白印迹,节约您宝贵的抗体。本产品仅用于WB实验中的抗体和标记物的稀释。
注意事项:
1、本产品属蛋白制剂,室温放置过久易导致蛋白的降解和活性丧失。
2、为了能使抗体可以反复多次使用,建议尽量在2~8℃进行一抗和蛋白膜的结合反应,以减缓一抗的衰减速度。
3、本产品含防腐剂,为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
操作步骤:
1.临用取出本产品,颠倒数次以混匀,取适量用于抗体稀释。一抗和二抗的稀释比例请参照厂家使用说明。
2.一次实验结束后,可以回收抗体稀释液,2~8℃保存,一周内可用于下次的WB。
储存条件:2~8℃
名称:一步法快速WB试剂盒(兔源一抗)
货号:WE0298
规格:50次
本试剂盒是百奥莱博zuì新研发的Western Blot检测试剂盒,能够在1小时左右得到高质量的Western Blot结果,且操作简便、检测灵敏度高、背景低、不需再加入二抗、系统稳定性强。常规的Western Blot间接法检测过程(封闭、一抗结合和二抗结合)需要较长的时间,实验流程复杂且需要多步条件优化。胶上的蛋白转移到载体膜上后,使用试剂盒中的封闭液孵育5 min,再用抗体反应液处理后的一抗孵育载体膜,经洗涤三次(每次5 min)后,即可进行发光或显色检测。本试剂盒针对目的蛋白一抗为兔来源的实验系统使用。
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组份
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50次
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Blocking
Buffer
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500ml
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Antibody Pretreat Solution(HRP/Rabbit)
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5×1ml
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Dilution Buffer
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500ml
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Wash Buffer(10×)
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500ml
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注意事项:
1、客户需自己准备兔来源的一抗。
2、使用Blocking Buffer封闭液、Antibody Pretreat Solution(HRP/Rabbit)抗体反应液(兔)、Wash Buffer(10×)漂洗液之前请充分混匀。
3、漂洗液如在2~8℃保存时出现沉淀,请恢复到室温,把沉淀溶解后正常使用,1×漂洗液可在室温保存一个月。
4、建议转膜完成后用丽春红等试剂染色,并把膜上多余部分剪去以增加试剂的使用效率。
5、一抗和抗体反应液HRP(兔)需要通过预实验来确定zuì佳的稀释用量。
6、抗体反应液HRP(兔)、抗体稀释液和抗体用量可根据膜的大小按比例放大或减少。
7、加入一抗的抗体稀释液可以回收重复使用一次。特异性及亲和力低的抗体不建议重复使用。回收后抗体如在1-2天内使用放置在2~8℃,长期保存请在-20℃冻存,避免多次反复冻融。
8、如果存在较高背景的情况,请调整抗体的用量,并增加洗膜次数。
9、试剂盒内所有试剂请于2~8℃保存,避免冻融。
操作步骤:
本产品适用于转膜完成后的封闭及抗体孵育步骤,以5cm×8cm 膜为例:
1、漂洗液准备:取10ml Wash Buffer(10×)用蒸馏水稀释至100ml,即为1×Wash Buffer,待用。每次洗膜用8-10ml。
2、封闭:转膜完成后,将膜浸没到10ml Blocking Buffer中,室温封闭5分钟。
3、漂洗:倒掉封闭液,加入8-10ml 1×Wash Buffer,于摇床上用较大速度漂洗1分钟。
4、洗膜的同时可准备抗体孵育液:取Antibody Pretreat Solution(HRP/Rabbit)100μl到离心管中,加入兔源一抗3-10μg,枪头吸打至充分混匀,室温孵育5分钟。加入至10ml Dilution Buffer中,充分混匀。
注意:
1)一抗的用量也可根据抗体的稀释度来进行调整。以抗体的zuì终稀释度1:1000为例,取100μl抗体反应液HRP(兔)到EP管中,加入10μl一抗,加入到10ml 抗体稀释液中,充分混匀,室温孵育5分钟。
2)如果膜面积较小,可按比例减少抗体、反应液及稀释液的用量。
5、完成步骤3后,倒掉漂洗液,将一抗、Antibody Pretreat Solution(HRP/Rabbit)及Dilution Buffer混合而成的抗体孵育液加到膜上(确保孵育液完全浸没膜表面),在摇床上以60 rpm左右的速度室温孵育40分钟。
6、弃去(回收)抗体孵育液,用配制的1×Wash Buffer漂洗3-5次,每次3分钟。
7、进行后续检测。建议采用ECL或者DAB法进行检测。
应用实例:
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实例一 抗原为293T细胞全裂解液
A:普通WB对照:beta-actin兔多抗 3.3ug 室温孵育40min,洗膜后二抗羊抗兔-HRP(WE0394)1:10000稀释,室温40min,ECL(WE0308)曝光
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实例二 抗原为293T细胞全裂解液
C:普通WB对照:PAK1,Epitomics兔单抗1:1000 室温孵育40min,洗膜后二抗羊抗兔-HRP(WE0394)1:10000稀释,室温40min,ECL(WE0308)曝光
D:一步法WB: Epitomics兔单抗1:1000 室温孵育40min,ECL(WE0308)曝光。
常见问题及解决方法:
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问题
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可能原因
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解决方案
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信号太弱或者
看不到条带
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蛋白上样量太少
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进行SDS-PAGE电泳时加大上样量。
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蛋白转膜效率太低
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优化转膜时间或者电流,确保转膜时膜与胶之间没有气泡。
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一抗亲和力较低
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增加膜在溶液中的孵育时间或者增加抗
体浓度可以增加信号
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一抗亲和力较低
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对于低亲和力抗体来说,减少洗膜时间可以增加信号。由每次10 分钟,减少到每次5分钟可以增加信号。
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背景偏高
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一抗使用过量
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减少一抗的使用量。
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一抗有非特异性结合或者
与封闭试剂有交叉反应
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使用和二抗来源一致的血清或者无IgG的BSA。
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洗膜时间太短
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增加洗涤的步骤可以进一步的降低背景。
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曝光显影时间过长
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减少曝光时间。如果信号和背景都高,可以等待一段时间
,等背景信号减弱后,再进行曝光。
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容器或者试剂被污染
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每次洗涤的时候使用清洁的容器。带手套,使用清洁的镊子处理膜。
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储存条件:2~8℃保存,避免冷冻
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关注
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货号
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名称
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规格
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BTN100302
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包涵体蛋白溶解及复性套装
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100次
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BTN131120
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8M盐酸胍溶液
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250mL
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SNM433
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WB二抗稀释液
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100ml
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SNM443
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考马斯亮蓝脱色液
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250ml
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SY0347
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DTT 二硫苏糖醇
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10g|100g
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SY0419
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DEAE弱阴离子纯化预装柱,1ML
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1ml
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SY0436
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人β-淀粉样多肽 1-42
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1mg
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