特别提示:包括蛋白酶抑制剂Cocktail, EDTA-free, 100×DMSO储液在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:蛋白酶抑制剂Cocktail, EDTA-free, 100×DMSO储液
英文名称:Protease Cocktail, EDTA-free, 100×DMSO Stock Solution
产品货号:SY0324
产品规格:1ml|10×1ml
细胞裂解后的蛋白粗提物中含有大量的内源性蛋白酶,这些酶可以降解细胞提取物中的蛋白。因此为了防止蛋白纯化过程中目的蛋白不受蛋白酶的破坏,需要加入蛋白酶抑制剂对其进行活性抑制。
本品是多种常见蛋白酶抑制剂的混合物,包含AEBSF、Aprotinin、Bestatin、E-64、Leupeptin、Pepstatin A多种成分,广谱抑制来源于动植物、细菌、酵母等组织或细胞内的多种蛋白酶,如丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、氨肽酶、酸性蛋白酶等。另外,本品不含EDTA(一种金属蛋白酶抑制剂),特别适用于活性中心为金属离子依赖的蛋白。兼容于后续的固定化金属离子亲和层析(Immobilized me
tal-chelate affinity chromatography, IMAC)、2-D 凝胶电泳以及天然凝胶电泳等蛋白分析实验。
本品为溶于DMSO的溶液,以100×储存液的形式提供,可用于WB, Co-IP, Pull-down assay, IF, IHC,激酶研究等多种分析。
使用方法:使用前将本品取出回温至室温,样品分析前按照1:100(v/v)的比例加入到样品溶液中,混匀即可。
储存条件:-20℃,有效期一年。
注意事项
1)本品具有广谱的蛋白酶抑制活性,但是不具有磷酸酶抑制剂活性。若进行磷酸化蛋白的研究,可使用我司的磷酸酶抑制剂混合物(100×)(Cat#SY0311)。
2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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货号
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名称
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规格
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SNM393
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β-巯基乙醇
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50ml
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SNM487
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胃蛋白酶
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1g
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SNM493
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防脱载玻片(经多聚赖氨酸处理)
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50片
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SY0357
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4×Tris-HCl浓缩胶缓冲液,pH6.8
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250ml
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SY0362
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丙烯酰胺
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500g
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SY0399
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链霉亲和素琼脂糖纯化树脂
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5ml
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SY0407
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12ml重力层析空柱
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5×1套
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关注
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名称:动植物总蛋白微量提取试剂盒
货号:BTN90707
规格:50次
本产品用于快速提取动植物总蛋白,用于SDS-PAGE凝胶电泳和Western印迹分析以及蛋白活性测定等。
产品特点:
1. 提取过程十分简便,匀浆离心即可,整个过程只需要十几分钟。
2. 采用独特的温和裂解成分,蛋白保持天然活性。
3.适用于各种动植物组织材料,包括新鲜或冰冻的材料。
4. 得到的提取物可以直接用于SDS-PAGE、2D电泳、Western印迹分析以及蛋白活性测定等下游实验。
5.一次可以处理100mg左右的样品,足够进行几十次SDS-PAGE mini胶电泳检测。
试剂盒组成:
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成分
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规格
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溶液A
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50ml
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5×SDS-PAGE上样液
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1ml
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说明书
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1份
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储存条件:常温运输,4℃保存,5×SDS-PAGE上样液短期4℃保存,长期可放-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
使用前,zuì好请在溶液A中加入自备的1M DTT溶液50μL。
一:
匀浆法
注意:对致密的实体组织(如肌肉),zuì好用Polytron 式匀浆机匀浆处理。
1. 称取动物或植物组织样品100mg,剪刀剪成黄豆大小,转移到10-15mL的塑料离心管中。
2. 加入1ml溶液A,在冰上用Polytron 式匀浆机匀浆,直到没有肉眼可见的组织块。为了避免产热,可以分多次匀浆,其间放冰上让匀浆液冷却。
3. 将匀浆液全部转移到1.5mL的塑料离心管中。
4. 4℃ 12000 g离心10分钟,组织残渣碎片将形成沉淀。
5. 将上清液转移至一新的1.5mL塑料离心管中即得到蛋白溶液,可置于-70℃冰箱保存或立即使用。如果要测定蛋白浓度,请使用BCA方法,不要使用Bradford方法(如果要使用,也需要把样品稀释10倍后再测定,否则溶液A中的成分会影响浓度侧定)。如果要进行SDS-PAGE电泳,可取部分到离心管中,加入5×SDS-PAGE上样缓冲液(终浓度为1×),在沸水中处理5分钟后立即上样电泳。
二:
直接研磨法
注意:可以使用玻璃和陶瓷的研钵,也可以使用与微量离心管式的研磨杵(BTN80603)
1. 称取动物或植物组织样品100mg,剪刀剪成黄豆大小,转移到预冷的研钵或离心管中。
2. 加入1ml溶液A,用研磨杵研磨,直到没有肉眼可见的组织块。
3. 将匀浆液全部转移到1.5mL的塑料离心管中。
4. 4℃ 12000g离心10分钟,组织残渣碎片将形成沉淀。
5. 将上清液转移至一新的1.5mL塑料离心管中即得到蛋白溶液,可置于-70℃冰箱保存或立即使用。如果要测定蛋白浓度,请使用BCA方法,不要使用Bradford方法(如果要使用,也需要把样品稀释10倍后再测定,否则溶液A中的成分会影响浓度侧定)。如果要进行SDS-PAGE电泳,可取部分到离心管中,加入5×SDS-PAGE上样缓冲液(终浓度为1×),在沸水中处理5分钟后立即上样电泳。
三:
液氮研磨法
注意:zuì好使用玻璃和陶瓷的研钵
1. 取大约100mg动物或植物组织样品,转移到预冷的研钵中。
2. 加入少量液氮,用研磨杵研磨成粉。
3. 加入1ml溶液A溶解,然后将溶液全部转移到1.5mL的塑料离心管中。
4. 4℃ 12000 g离心10分钟,组织残渣碎片将形成沉淀。
5. 将上清液转移至一新的1.5mL塑料离心管中即得到蛋白溶液,可置于-70℃冰箱保存或立即使用。如果要测定蛋白浓度,请使用BCA方法,不要使用Bradford方法(如果要使用,也需要把样品稀释10倍后再测定,否则溶液A中的成分会影响浓度侧定)。如果要进行SDS-PAGE电泳,可取部分到离心管中,加入5× SDS-PAGE上样缓冲液(终浓度为1×),在沸水中处理5分钟后立即上样电泳。
注意事项:
1.如果4℃ 12000g离心10分钟后得到的上清液中还有可见的沉淀,可以将上清转移到一个新的离心管中后再4℃ 12000g离心10分钟,以去除可见的小碎片。
2.植物组织中存在有大量的多酚、多糖、色素、次生代谢产物,如果需要除去植物蛋白样品中残存的色素等杂质,可以在zuì后得到的上清液中加入5倍体积的冷丙酮或冷甲醇,混匀后-20℃放置1小时或过夜,然后4℃,12000rpm离心10min,弃上清后室温风干,然后将样品溶于自备的后续实验缓冲液中即可。经过此纯化处理后,部分蛋白质可能会发生变性,不能再用于活性检测。
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