KFS094 10×CAPS电转移缓冲液

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特别提示：包括10×CAPS电转移缓冲液(不含甘氨酸，适合大分子量蛋白转移)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：10×CAPS电转移缓冲液(不含甘氨酸，适合大分子量蛋白转移)
产品货号：KFS094
产品规格：500ml

本产品作为蛋白电泳完毕后，将凝胶上蛋白电转移到PVDF 膜或其它膜上的缓冲液，pH11，含CAPS，不含有甘氨酸，本电泳缓冲液适合大分子量蛋白电转移。

使用时按10×电转移缓冲液：甲醇：蒸馏水=1：1：8 的比例配制成1×的工作液，就可以用于电转移实验。

储存：RT，有效期一年。

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名称：蛋白质分子量标准(14.4-116kD)
货号：YT627
规格：200μl|1ml
本品包含了从14.4kD到116kD共7种纯化的蛋白质(见下图)，适合作为SDS-PAGE的蛋白质分子量标准。一个包装的本产品后续如果用于考马斯亮蓝染色，大约可以使用约20-40次。

产品特点：
1. 本蛋白质分子量标准已经配制在1X SDS-PAGE上样缓冲液中，可以直接使用。
2. 根据上样孔的大小，本蛋白质分子量标准通常每次上样5-10微升，就可以用染色观察到非常清楚的蛋白条带。


本蛋白Marker包含7个条带：14.4kD，18.4kD，25kD，35kD，45kD，66.2kD，116kD

注意事项：
1. 本蛋白质分子量标准用1X SDS-PAGE上样缓冲液配制，不适用于非变性PAGE胶。
2. Western实验时，建议使用百奥莱博的彩色预染蛋白分子量标准(YT621、YT622)，以便更好地观察转膜效果。

储存条件：-20℃，有效期一年。

名称：Protein G琼脂糖凝胶
货号：WE0270
规格：5ml
  本产品为Protein G与Sepharose偶联后产物，可从血清，腹水，细胞培养上清和细胞抽提物中分离和纯化多种哺乳动物丌同亚型的抗体或包含抗体Fc片段的基因工程重组蛋白。Protein G是链球菌(group C和G)细胞表面蛋白。它不Protein A类似，通过不免疫球蛋白的Fc区相互作用，可结合大多数哺乳动物的IgG。但两者结合特异性有所丌同。Protein G对人IgG3，小鼠IgG1，大鼠IgG2a等具有高亲和力。天然Protein G具有白蛋白和细胞表面结合域。重组Protein G去除了白蛋白和细胞表面结合域，以减少非特异性结合。本产品具有广谱 IgG结合、高Fc段结合活性、高抗体吸附量和性能稳定等特点，可重复多次使用。

注意事项：
1、凝胶从冷室或冰箱中取出后在室温下缓慢振摇恢复到室温后装柱，避免产生气泡影响柱效。
2、装柱时尽可能维持凝胶长径比为5:3-2:1，长径比过大将导致洗脱峰拖尾，洗脱体积增大；长径比过小将导致样品与填料接触时间短，吸附不充分，填料吸附蛋白量小。
3、若上样液中抗体浓度过高，应使用平衡缓冲液稀释至1-2 mg/ml，以免上样浓度过高影响柱效。
4、可以采用降低上样时的流速来增加样品与填料接触时间从而提高纯化抗体量。
5、凝胶用低pH缓冲液洗脱时间应尽可能短，洗脱后用中性缓冲液尽快中和至pH中性，以延长亲和介质的使用寿命。
6、洗脱后，应立刻用如中和缓冲液将收集到的抗体溶液中和到中性(pH7.4左右)，以利于维持抗体的生物活性，避免抗体失活。
7、填料使用后应用0.1 M柠檬酸钠缓冲液(pH3.0)做再生处理，长期采用端的洗脱条件将缩短亲和介质的使用寿命。

使用方法：

I 缓冲液的准备
1、平衡缓冲液：20 mM PBS，150 mM NaCl，pH7.4-8.5。
2、洗脱缓冲液：0.1 M Glycine，pH2.5-3.0。
3、再生缓冲液：1 M NaCl。
4、中和缓冲液：1 M Tris-Cl，pH9.0。
注意：
1)以上缓冲液使用前均需0.45μM滤膜过滤。
2)为提高抗体和介质的吸附力。可适当提高平衡缓冲液中的盐浓度和ph值。

II 样本制备
1、样品用平衡缓冲液稀释5-10倍。
2、细胞培养液中大量的血清蛋白会对亲和层析造成一定的干扰，去血清处理或稀释样品将提高纯化抗体收率。
注意：样品在上柱前需0.45μM微孔滤膜过滤。

III 操作步骤
1、将Protein G-Sepharose填料混匀后加入层析柱，室温静置10分钟，待凝胶与溶液分层后，把底部的出液口打开，让乙醇通过重力作用缓慢流出。
2、向装填后的柱中加入3-5个柱床体积的超纯水将乙醇冲洗干净，用平衡缓冲液流洗5-10个柱床体积平衡柱子。
3、将样品上柱，上样流速60 cm/h。
4、平衡缓冲液再洗5-10个柱床体积，直至基线平稳。
5、洗脱缓冲液洗脱，收集洗脱峰，用中和缓冲液将洗脱收集样品中和到中性。
6、立即用5-10个柱床体积平衡缓冲液平衡柱子到中性。
7、再生缓冲液流洗3-5个柱床体积。先后用纯水、20%乙醇分别流洗3-5个柱床体积。柱子置于2～8℃保存。
注意：操作中如果没有实时的蛋白监测系统，收集洗脱峰时可以分阶段收集到多个管中，zuì后根据测定结果重新调整收集方式。
8、本产品使用10次以上后先用20%乙醇洗5个柱床体积，再用70%乙醇洗脱5-10个柱床体积，再用20%乙醇流洗3-5个柱床体积。柱子置于2～8℃保存。

储存条件：2～8℃，避免冷冻

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