WH0155 高通量96孔板高纯度质粒提取试剂

高通量96孔板高纯度质粒提取试剂由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品用于生化实验研究等领域，我公司专注于DNA提取纯化产品的研发、生产和供应，为您提供的高通量96孔板高纯度质粒提取试剂质量可靠，批间差小，且价格公道，热切盼望您选购我们的产品。

北京百奥莱博科技有限公司是一家专业的生物试剂销售公司。公司主要经营血清、抗原、抗体等生物试剂产品，可以为您提供专业的技术服务，以优良的价格、优质的服务、优先的理念，满足客户的各方面的需求，与国内多家企业、单位建立了良好的长期合作关系，拥有较好的企业信誉和品牌形象。

特别提示：包括高通量96孔板高纯度质粒提取试剂盒（特异性吸附板法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：高通量96孔板高纯度质粒提取试剂盒（特异性吸附板法)
英文名称：96wells High-purified Plasmid Extraction Kit
产品货号：WH0155
产品规格：4×96孔|24×96孔板

本试剂盒的96孔吸附板的膜采用了我公司硅基质材料，能够、专一的吸附质粒DNA，zuì大限度去除蛋白及其他杂质，从而保证提取质粒的纯度。每孔zuì多处理1.3ml高拷贝质粒菌液，从中可快速提取多至5-10μg质粒DNA（产量与质粒拷贝数、细菌状态等因素有关）。使用该试剂盒提取的质粒DNA可用于限制性酶切、测序、文库筛选，连接和转化等分子生物学实验。

产品特点：
·提取速度快。
·配备了独特的BaiRed试剂，可以清晰辨明抽提过程中样本的裂解程度，确保得到率、高纯度的质粒DNA。
·纯度高：可直接用于下游实验。
·可用于高通量自动化核酸提取工作站。

提取实例：

使用本试剂盒处理1ml过夜培养的大肠杆菌（0)菌液（LB培养基)，平均得到5～6μg的高纯度pBS质粒。

组分	4板	24板
平衡液BL	240ml	3×500ml
溶液P1	125ml	3×240ml
溶液P2	125ml	3×240ml
溶液P3	160ml	4×250ml
去蛋白液PD	240ml	3×500ml
漂洗液PW	3×50ml	2×500ml
洗脱缓冲液TB	60ml	240ml
BaiRed	700μl	4×1ml
RNaseA（10mg/ml)	1.25ml	6×1.25ml
半裙边96孔吸附板CP3	4个	24个
半裙边96孔过滤板	4个	24个
96孔深孔板	16个	96个
250ml试剂瓶	-	1个
封口膜	16张	96张
透气膜	5张	25张

储存条件：室温（15-25℃)干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。溶液P1加入RNase A后，应置于2-8℃保存，可稳定保存12个月。单独包装的RNase A可在室温保存12个月。

注意事项：请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1．96孔板细菌培养方法：将含相应抗生素的培养基加入96孔深孔板中，每孔添加1.0-1.3ml培养基且挑取单克隆摇菌，加盖透气膜封板以防污染，在220-280rpm 37℃条件下培养20-24h。
2．溶液P1使用前先加入RNase A （请分批配制，每125 ml P1加入1.25 ml RNase A （10mg/ml），可用于4板提取反应），混匀，置于2-8℃保存。
3．每次使用前取50 ml漂洗液PW并加入200 ml无水乙醇摇匀后使用。
4．使用前先检查平衡液BL、溶液P2和P3是否出现浑浊，如有混浊现象，可置于37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。溶液P2和P3使用后应立即盖紧盖子。
5．所有离心步骤均为室温下进行离心。
6．提取的质粒量与细菌的培养浓度、宿主菌、质粒拷贝数等因素有关。
7．实验前使用平衡液处理吸附板，可以zuì大限度激活硅基质膜，提高得率。
8．用平衡液处理过的吸附板zuì好当天使用，放置时间过长会影响提取效果。

BaiRed使用方法：
BaiRed是一种颜色指示剂，用以指示整个操作的正确性，不影响任何下游实验且对人体无害。为可选试剂，客户根据需求选择是否添加。

使用方法：若选择添加，则在使用之前按BaiRed:P1=1:200进行添加，颠倒混匀至完全匀相。在使用时添加BaiRed的P1溶液为红色；添加P2之后红色完全变为紫色说明充分裂解；再添加P3溶液之后匀相状态为黄色说明中和复性充分。

操作步骤：（离心法)
1．平衡96孔吸附板：将96孔吸附板CP3和96孔深孔板叠放在一起，向吸附板中每孔加入500μl的平衡液BL，3,600 rpm（～2,130×g)离心3 min，倒掉深孔板中的废液，将吸附板重新放在深孔板上。（请使用当天处理过的吸附板）。
2．集菌步骤：向一个新的96孔深孔板中添加1.0-1.3ml摇好的菌液（或者取摇好菌液的96孔板），加盖封口膜，3,600 rpm（～2,130×g)离心10min收集菌体，倒掉培养基，倒扣于吸水纸上除去残留的培养基（如果菌体浓度较低，可以重复集菌一次）。
3．向每孔收集好的细菌培养物中加入250 μl溶液P1 （请先检查是否已加入RNase A)，加盖封口膜，使用漩涡混合器彻底悬浮菌体。
  注意：若溶液P1添加BaiRed试剂，则此时为红色。
4．揭去封口膜，向96孔深孔板中每孔加入250 μl溶液P2，加盖新的封口膜，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解，瞬时离心使封口膜上的水珠落回板中。
  注意：温和地混合，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，若使用BaiRed试剂，完全混匀时颜色为紫色，若裂解不充分会有部分红色残留。混匀后菌液应变得清亮粘稠，所用时间不应超过5 min，以免质粒受到破坏。
5．揭去封口膜，向96孔深孔板中每孔加入350 μl溶液P3，加盖新的封口膜，立即温和地上下翻转6-8次使其充分混匀。
  注意：溶液P3加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。若使用了BaiRed试剂，完全混匀应从紫色变为黄色。
6．将96孔过滤板和一个新的96孔深孔板叠放在一起，取750 μl上步得到的裂解溶液转入对应的96孔过滤板中（过滤板的承载量为750 μl），3,600 rpm（～2,130×g)离心5 min。
7．将过滤液全部转入第1步平衡好的96孔吸附板CP3中（96孔吸附板CP3叠放在收集废液的96孔深孔板上），3,600 rpm（～2,130×g)离心5 min，倒掉深孔板中的废液，将吸附板重新放在深孔板上。
8．可选步骤：向吸附板CP3每孔中加入500μl去蛋白液PD，3,600 rpm（～2,130×g)离心5min，倒掉深孔板中的废液，将吸附板重新放在深孔板上。
  注意：如果宿主菌是end A＋宿主菌（TG1,BL21,HB101,JM系列等），这些宿主菌含有大量的核酸酶，易降解质粒DNA，强烈推荐采用此步。
     如果宿主菌是end A－宿主菌（DH5α，0等），这步可省略。
9．向96孔吸附板CP3每孔中加入700 μl漂洗液PW （请先检查是否已加入无水乙醇），3,600 rpm（～2,130×g)离心5 min，倒掉收集板中的废液。
10．重复操作步骤9。
11．将96孔吸附板CP3叠放在96孔深孔板上，置于3,600 rpm（～2,130×g)离心10min，目的是将吸附板中残余的漂洗液去除。
  注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。
12．将吸附板CP3放入新的96孔深孔板中，使用排枪向96孔CP3吸附膜的中间部位悬空滴加80-100 μl洗脱缓冲液TB或ddH2O（pH≥7.5)，室温放置5-6min，3,600 rpm（～2,130×g)离心10min将质粒溶液收集到收集板中。
  注意：通常100 μl的洗脱液在洗脱后能回收到平均55 μl的DNA产物。为增加核酸的得率，可以适当增加洗脱液的体积（比如采用120 μl洗脱液进行洗脱）。此外，洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。

操作步骤：（负压法)
1．平衡96孔吸附板CP3：将96孔吸附板CP3放入负压装置中，每孔加入500μl的平衡液BL，开启并调节负压，抽掉吸附板中的溶液。（请使用当天处理过的吸附板）
2．以下步骤同（一）离心法中的第2-5步骤操作方法。
3．接（一）离心法第5步骤之后，将96孔过滤板和第1步平衡好的96孔吸附板CP3叠放后置于负压装备上，过滤板每一个孔需对应吸附板的每一个孔。
  注意：此步操作应按照各种品牌的负压装置要求进行操作。
4．取上步得到的裂解溶液750 μl左右，转入对应的96孔过滤板中（过滤板的承载量为750μl），调节负压抽干溶液。
5．可选步骤：向吸附板CP3每孔中加入500μl去蛋白液PD，调节负压抽干溶液。
  注意：如果宿主菌是end A＋宿主菌（TG1,BL21,HB101,JM系列等），这些宿主菌含有大量的核酸酶，易降解质粒DNA，强烈推荐采用此步。如果宿主菌是end A－宿主菌（DH5α,0等），这步可省略。
6．向96孔吸附板CP3每孔中加700 μl漂洗液PW，调节负压抽干溶液。
7．重复步骤6。
8．使用zuì大负压继续抽10min，以彻底抽干吸附材料中残余的漂洗液。若柱尾仍然含有水珠用吸水纸吸干即可。
9．将吸附板CP3放入一个新的96孔深孔板中，使用排枪向96孔CP3吸附膜的中间部位悬空滴加80-100 μl洗脱缓冲液TB或ddH20（pH≥7.5)，室温放置5-6 min，3,600 rpm（～2,130×g)离心10min将质粒溶液收集到深孔板中。

DNA浓度及纯度检测：
1．DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
2．DNA应在OD₂₆₀处有显著吸收峰，OD₂₆₀值为1相当于大约双链DNA 50 μg/ml、单链DNA40 μg/ml。OD₂₆₀/OD₂₈₀比值应为1.7-1.9。

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名称：柱式分枝杆菌DNA提取试剂盒
货号：BTN70703
规格：50次
分枝杆菌属(Mycobacterium)是为古老的细菌，与人类的疾病相关的就有25种以上，包括引起结核病的结核分枝杆菌(Mycobacteria tubercμLosis)。近年来由于多重耐药性分枝杆菌的出现，分枝杆菌再次成为人们关心的细菌。PCR快速诊断是目前检测分枝杆菌的主流方法，但由于此类细菌具有十分独特的坚硬的细胞壁，快速提取其基因组DNA一直是十分棘手的技术问题。本产品就是为解决这一问题而开发。

试剂盒特点：
1. 操作简单，客户不需要准备额外的试剂。
2. PCR检测灵敏度一般在10-100CFU/mL样品。
3. 既可以使用培养的细菌，也可以使用痰液、精液、血液、脑脊液等样品。
4. 价廉物美，与国外同类产品相比质量相当，但价格。
5. 安全，本试剂盒对人体无害，无腐蚀性和刺激性气味。

试剂盒组成：

成分	规格
化痰液	100ml
溶液A	7.5ml
溶液B	15ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液2.0	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用方法：
注意：文献报道部分分枝杆菌在DNA提取过程中还有形成菌落的能力，所以任何丢弃的溶液都必须按有传染性的污染物品对待，并严格按有关部门要求进行消毒处理。

一:培养的分枝杆菌样品的预处理
1. 刮取培养的分枝杆菌到0.5mL自备TE缓冲液中。
2. 80℃放置20分钟以杀灭细菌。
3. 3000 g室温离心15分钟，弃上清。
4.细菌沉淀放-20℃冰箱备用或直接进入细菌基因组DNA提取步骤。
二:含分枝杆菌的痰液样品的预处理
1. 将需要处理的痰液样品加入到干净的10mL或15mL塑料离心管中。
2. 加入等体积的化痰液，充分混合均匀后室温放置15-30分钟。如果痰很浓，可以延长保温时间。
3. 3000 g室温离心15分钟，弃上清。
4.细菌沉淀放-20℃冰箱备用或直接进入细菌基因组DNA提取步骤。
三:含分枝杆菌的血液样品的预处理
1. 用自备红细胞裂解液对血液进行红细胞裂解处理，具体操作见百奥莱博红细胞裂解液(BTN60403)使用手册。
2. 将得到的白细胞沉淀-20℃或更低温度放置10分钟。
3. 迅速将得到的白细胞沉淀100℃加热10分钟。
4.上述处理将使大部分白细胞破裂，加入自备的TE或PBS缓冲液,直到离心管体积的一半位置。此步使白细胞的DNA进入缓冲液中。
5.离心5-10分钟沉淀细菌，离心速度取决于离心管的大小。如果样品在1.5mL离心管，则可以12000～15000g室温离心。如果样品在10-15mL离心管，则3000-5000g室温离心。
6. 吸弃上清(含白细胞DNA)后所得细菌沉淀可以放-20℃冰箱备用或直接进入细菌基因组DNA提取步骤。
四:细菌基因组DNA的提取
1. 将150μl 65℃预热过的溶液A加到有细菌沉淀的离心管中，充分震荡混匀。
2. 将细菌和溶液A的混合物转移到一个干净的1.5mL塑料螺旋盖离心管中。强烈建议不要使用压盖式塑料离心管，否则后面处理过程中溶液容易漏出。
3. 加入300μl溶液B和300μl自备lǜ仿，充分震荡混匀。
4. -20℃放置直到液体凝固，一般需要20-60分钟。过夜放置也可。
5. 放室温融化后振荡半分钟。
6. 12000～15000g室温离心3～5分钟，小心转移上清到离心吸附柱中，室温放置2分钟。
7. 12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
8. 加入0.5mL通用洗柱液 12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
9. 重复第8步的洗涤过程一次。
10. 短暂离心半分钟。此步不要省略，否则残留的洗柱液(含乙醇)将会影响DNA电泳、酶切和PCR等反应。
11. 将离心吸附柱转移到一新的离心管中，加入30-100μL DNA洗脱液2.0，12000～15000g室温离心半分钟，所得溶液即基因组DNA。

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