特别提示:包括kFluor488标记抗小鼠免疫荧光染色试剂盒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:kFluor488标记抗小鼠免疫荧光染色试剂盒
英文名称:Immunol Fluorescence Staining Kit with kFluor488-Labeled Goat Anti-Mouse IgG
产品货号:KFS049
产品规格:300T
适用于细胞或组织切片的免疫荧光染色。在有适当的一抗检测特定的目标蛋白时,就可以使用免疫荧光染色试剂盒检测到红色、绿色或蓝色等荧光。含有kFluor488标记的山羊抗小鼠IgG(H+L)抗体,可以用于检测兔来源的相应一抗,观察到的颜色为非常鲜艳的绿色。kFluor488(Ex/Em:495nm/519nm)是一种常用的非常明亮的绿色荧光探针。它比大部分常用的绿色荧光探针更加明亮,更加不容易淬灭,而且背景更低。kFluor488的荧光光谱与FITC和Cy2比较接近。
本试剂盒提供了含有荧光标记抗体稳定剂的免疫荧光染色二抗稀释液,可以确保荧光标记抗体稀释后在4℃可以保存长达6个月,并且在6个月内至少可以重复使用10次。
本试剂盒含有抗荧光淬灭封片液,可以使荧光更加持久。
本试剂盒对于六孔板内的细胞样品或常规切片,至少可以检测300个样品。
注意事项
1. 需荧光显微镜或激光共聚焦显微镜。
2. 在使用抗荧光淬灭封片液的情况下可以减缓淬灭,但仍宜尽量避光,特别是需要尽量缩短在荧光显微镜下的观察时间。
3. 荧光物质均易发生淬灭,染色后宜尽快进行荧光显微镜下的观察。如果不能及时观察可以4℃避光保存,但存放时间通常不宜超过一周,随着存放时间的延长可能会导致观察效果越来越差。免疫荧光染色效果的好坏和一抗的关系非常密切。建议选购有较多文献报道的并注明可以用于免疫荧光染色的一抗用于本实验。
4. 如果观察时发现荧光过弱,可以适当提高一抗的浓度;如果荧光还是比较弱,可以适当提高荧光标记抗体的浓度。
5. 需自行配制用于免疫荧光染色的相关试剂,需自备盖玻片和载玻片。
6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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名称:动物细胞裂解液B(变性)
货号:BTN80807B
规格:100mL
本产品含有多种细胞裂解成分和蛋白酶抑制成分,可以在非变性或变性条件下迅速裂解组织或培养细胞,使之释放出细胞内蛋白,用于后续实验。
产品特点:
1.快速裂解,多种裂解成分经过精心优化,能快速使细胞裂解。
2. 非变性(BTN80807A)产品能zuì大程度地保留蛋白天然结构和功能,主要用于免疫沉淀和免疫共沉淀,还可以用于蛋白活性检测(信号传递研究和酶动力学检测)和Western Blot等各种后续实验。
3.变性(BTN80807B)裂解细胞的效率更高,主要用于对抗原空间构型不敏感的免疫共沉淀实验,还可以用于Western Blotting。
4.适用于培养细胞(包括悬浮细胞)和新鲜组织。
储存条件:常温运输、4℃保存,有效期一年。
注意事项:
1. 如果在本产品中额外再加入终浓度为1×的、新鲜配制的蛋白酶抑制剂复合物,可以更有效地抑制蛋白酶活性,防止蛋白降解。
2. 如果用于信号传递研究,zuì好在本产品中加入终浓度为1×的、新鲜配制的磷酸酶抑制剂复合物。
3. 整个裂解步骤都要在冰浴或4℃操作。本产品和PBS 均需预先冷却。
4. 本产品所含有较高浓度的去垢剂会对Bradford蛋白浓度测定有较大影响,因此只能使用BCA法测定蛋白浓度。
使用方法:
一:
处理贴壁的培养细胞
1. 去除贴壁细胞培养液,用冰浴预冷的PBS 洗两遍,去尽残留的PBS。
2. 将培养板放置在冰上待用。
3. 按每106个细胞加入0.1mL 本产品(或100mm 贴壁细胞加1mL 本产品)的比例向培养板中加入适量的本产品(按此比例裂解得到的裂解物的蛋白浓度约在5-10mg/mL 之间)。
注意:裂解效率跟细胞数量和本产品用量的比例密切相关。一般情况下6孔板的单孔(1~2×106细胞)需要0.1~0.2mL本产品;25 cm2培养瓶(3~6×106细胞)需要0.3~0.6mL;75 cm2培养瓶(1~2×107细胞)需要1~2mL。对于特别大或特别小的细胞,需要用户摸索zuì佳用量。
4. 冰上放置10-30分钟(zuì佳时间跟细胞系相关),其间偶尔轻轻摇晃或用枪头轻轻吹打。
5. 将细胞培养板倾斜使上清液汇集在一端,并将其全部转移到一个新的1.5mL塑料离心管中。
6. 15000×g,4℃离心10分钟,将上清转移到一个新的1.5mL塑料离心管中,放置在冰上待用或放-80℃长期保存。注意:如果用于免疫沉淀,zuì好新鲜使用。
7. 用前zuì好先测定上清液的蛋白浓度,然后再进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。
二:
处理悬浮细胞
1. 400×g,4℃离心10分钟收集悬浮细胞,弃上清。
2. 用等体积的预冷PBS 洗涤细胞沉淀两遍,步骤同步。
3. 按每106个细胞加入0.1mL 本产品的比例加入本产品,充分悬浮细胞。
4. 冰上放置15分钟裂解细胞,期间偶尔轻柔震荡。
5. 15000×g,4℃离心10分钟,将上清转移到一个新的1.5mL塑料离心管中。为避免吸取到细胞沉淀,zuì好留20-40μL液体不取。
6. 将上清液放置在冰上待用或放-80℃长期保存。注意:如果用于免疫沉淀,zuì好新鲜使用。
7. 使用前zuì好先测定上清液的蛋白浓度,然后再进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。
三:
处理组织块
1. 称量组织块,用毛玻片或玻璃匀浆器研磨或匀浆,用5-10倍体积的、预冷的PBS洗两次(包括冲洗器材)。
2. 将匀浆物转移到离心管中,1500g、4℃离心5分钟后弃上清。
3. 按每50mg 组织加入0.2mL 本产品的比例加入预冷的本产品,吹打混匀,放置冰上。
4. 每隔5分钟振荡器轻柔振荡一次,共4次。
5. 15000×g、4℃离心10分钟,将上清转移到一个新的1.5mL塑料离心管中,放置在冰上待用或放-80℃长期保存。注意:如果用于免疫沉淀,zuì好新鲜使用。
6. 使用前zuì好先测定上清液的蛋白浓度,然后再进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。

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