YT002 质粒中量抽提试剂盒

质粒中量抽提试剂盒的品牌是百奥莱博，是优质的克隆与表达产品，本制品仅用于生物化学研究方面，本产品质量好，且具价格，深为用户称道，了解更多质粒中量抽提试剂盒等克隆与表达产品请联系我司咨询订购。

北京百奥莱博科技有限公司是一家专业的生物试剂销售公司。公司主要经营血清、抗原、抗体等生物试剂产品，可以为您提供专业的技术服务，以优良的价格、优质的服务、优先的理念，满足客户的各方面的需求，与国内多家企业、单位建立了良好的长期合作关系，拥有较好的企业信誉和品牌形象。

特别提示：包括质粒中量抽提试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：质粒中量抽提试剂盒
英文名称：Plasmid Midi Preparation Kit
产品货号：YT002
产品规格：50次

本试剂盒是一种用于从大肠杆菌中进行中量质粒的快速抽提的试剂盒。本试剂盒采用了一种的离子交换柱。在特定条件下，使质粒能在离心过柱的瞬间，结合到质粒纯化柱上，在一定条件下又能将质粒充分洗脱，从而实现质粒的快速纯化。无需酚lǜ仿抽提，无需酒精沉淀，12个样品只需不足60分钟即可完成。两步过柱纯化，使质粒纯度进一步提高，达到转细胞级要求。无需高速冷冻离心机，只需普通台式高速离心机。所有操作均可在1.5ml离心管中完成。每个质粒纯化柱可以结合的质粒量的上限约为50微克。每个纯化柱可用于抽提5-10毫升用LB培养过夜的大肠杆菌。抽提所得质粒的OD值一般在1.80左右。抽提获得的质粒量会受质粒拷贝数等因素影响。抽提获得的质粒DNA的OD值也会因菌种不同等原因而略有波动。

由本试剂盒所得质粒可直接用于转染细胞，DNA测序，PCR，基于PCR的突变，体外转录，转化细菌，内切酶消化等。本试剂盒抽提的含Firefly luciferase 或Renila luciferase报告基因的质粒，用Lipofectmine 2000或Fugene 6转细胞，报告基因检测结果表明仅0.5微克受SV40启动子控制的质粒转化12孔板内的一孔原代贴壁细胞，总RLU值约为五百万，测定时间为10秒。

内毒素(endotoxin)含量低。用对内毒素敏感的细胞转染受内毒素响应的报告基因质粒，与进口品牌的同类产品检测结果完全一致。

产品组份：
溶液I (悬浮液)———————————45ml
溶液II (裂解液)——————————45ml
溶液III (结合液)—————————60ml
溶液IV (洗涤液)——————————36ml (次使用前加入54ml无水乙醇)
溶液V (洗脱液)——————————15ml
溶液VI (DNA纯化结合液)——————35ml
RNase A (100mg/ml)————————45μl
中抽质粒纯化柱及废液收集管————50套

注意事项：
·次使用前把试剂盒提供的RNase A全部加到溶液I(悬浮液)中，混匀，并在瓶上做好标记。加入RNase A后4℃存放。
·次使用前在每瓶溶液IV(洗涤液)中加入54ml无水乙醇，混匀，并在瓶上做好标记。
·温度较低时，溶液II和溶液III可能会有沉淀产生。使用前必须检查一遍。如有沉淀，37℃水浴加热溶解，混匀后使用。溶液II请勿过分剧烈混匀，否则会产生大量气泡。
·溶液II使用完后，一定要盖紧瓶盖，防止被空气中二氧化碳酸化。
·溶液II有强碱性，溶液II和溶液III对人体都有刺激性，操作时请小心，并注意适当防护。
·本试剂盒所有操作均在室温进行，操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行。
·废液收集管在一次抽提中需多次使用，切勿中途丢弃。

储存条件：室温，有效期一年。

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BTN130806 pression/BTN130806.html" target="_blank">胚胎裂解液 1mL
BTN90505 pression/BTN90505.html" target="_blank">大肠杆菌BL21(DE3)化学感受态细胞 0.1mL*10
BTN80909 pression/BTN80909.html" target="_blank">IPTG溶液 1.5mL
BTN60206 pression/BTN60206.html" target="_blank">氨苄青霉素溶液 10mL
YT006 pression/YT006.html" target="_blank">RNase A (100mg/ml)(不含DNase) 0.5ml
YT414 pression/YT414.html" target="_blank">10% SDS水溶液 100ml
YT445 pression/YT445.html" target="_blank">AP1荧光素酶报告基因质粒 1μg
YT447 pression/YT447.html" target="_blank">ARE荧光素酶报告基因质粒(抗氧化响应元件) 1μg

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名称：即用型蓝白T载体A型(T7-SP6，有MCS)
货号：BTN60603
规格：20次
本产品是用Xcm I酶切环状的可保种型蓝白T载体(BTN60803)去掉一段1.3Kb的插入片段后得到的线性DNA片段(载体部分)，其两个末端的5′都有一个突出的T，可以用于快速克隆具有加尾活性的耐热酶(如Taq DNA聚合酶)扩增得到的PCR片段。

产品特点：
1. 由于是通过Xcm I酶切制备，所以载体两端的带T率为，远高于用Taq DNA聚合酶和TdT末端转移酶在平末端载体加尾得到的T载体。
2. 克隆的阳性率一般在90%以上，缩短了筛选过程。
3. 插入位点两侧有对称的常见酶切位点(如EcoR I)，便于对克隆的PCR片段进行近一步的分析。
4. 克隆位点两侧分别有T7和T3 RNA聚合酶启动子，便于用克隆的PCR片段制备RNA探针。
5.可以使用pUC/M13 Forward和Reverse测序引物测定插入片段的序列。
6. T克隆位点位于β-半乳糖苷酶的α-肽编码区内，可以进行蓝白斑筛选。
7.含有丝状噬菌体f1 复制起始子，可以制备单链DNA。

产品组成：

成分	规格
即用型蓝白T载体(40ng/uL)	20μl
阳性对照(40ng/uL)	5μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期两年。

使用方法：

一. PCR产物的纯化和定量
1. 将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳分离。zuì好不要使用TBE缓冲液，因为它会影响DNA的胶回收效率。
2.在长波(360nm)紫外灯下快速切胶，尽可能切掉多余的凝胶。为避免嘧啶二聚体的形成，可以使用百奥莱博的DNA防护剂UV Scavenger(BTN60601)。
3. 用百奥莱博的柱式DNArc(BTN60202)纯化回收PCR片段。溶解PCR片段的超纯水体积越小越便于后续操作。
4. 将回收的片段与浓度已知的DNA Marker在含EB(BTN3180)或绿如蓝染料(BTN70303)的琼脂糖凝胶中电泳，通过比较DNA条带的荧光强度而估测PCR纯化产物的浓度。注意：一般不推荐使用测OD260的方法，因为回收的DNA很珍贵，该方法需要比较多的DNA。
5. 如果所得的DNA片段浓度较低，可以使用本公司核酸浓缩剂(BTN110801)将其浓缩到需要的浓度。
6. 如果PCR片段为平末端，则需要用加A试剂盒处理，否则不能用于与T载体的连接反应。

二. 连接反应
1. 短暂离心装有T载体的离心管。
2.在两个离心管中加入下列成分：

成分	样品管	负对照	正对照
自备T4 Ligase Buffer，10×	1μl	1μl	1μl
蓝白T载体(40 ng/uL)	1μl	1μl	1μl
自备PCR纯化产物	见下注	不加	不加
阳性对照(40ng/uL)	不加	不加	1μl
自备T4 Ligase(5-10U/μL)	1μl	1μl	1μl
补超纯水到	10μl	10μl	10μl

注：PCR纯化产物与蓝白T载体的摩尔比zuì好为3-10，可以按下面的公式计算出连接反应中需要的PCR纯化产物的ng数:

假如插入片段和载体的连接比例设定为3，连接反应中加入蓝白T载体(长度为3Kb)的量为40ng，则需要长度为0.5Kb的PCR纯化产物的量是:

3. 用移液器吹打连接反应使之混匀后，16℃孵育12小时(或按T4 Ligase供货商提供的说明书进行连接)。

三. 细菌转化
1. 将100μL感受态细胞于冰上解冻。注意：zuì好使用转化效率在1×108cfu/μg DNA以上的感受态细胞进行转化，因为采用单碱基突出端进行连接不是很有效。
2. 取5μL连接产物加入到感受态细胞中，轻轻旋转几次以混匀内容物。在冰上放置30分钟。
3. 将管放入预加温到42℃的水浴中，热休克90秒。快速将管转移到冰浴中。

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