WH0127 石蜡包埋组织miRNA提取试剂盒

石蜡包埋组织miRNA提取试剂盒由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于科研目的，本品质量稳定，价位合理，需要石蜡包埋组织miRNA提取试剂盒等RNA提取纯化产品的客户，请到我公司官网联系我们。

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特别提示：包括石蜡包埋组织miRNA提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：石蜡包埋组织miRNA提取试剂盒
英文名称：miRNA Extraction Kit from FFPE
产品货号：WH0127
产品规格：50次

本试剂盒提供独特的裂解和孵育条件，可以逆转福尔马林对RNA造成的交联。在二甲苯脱蜡后，利用特别研制的裂解缓冲液处理，可有效地将RNA从组织切片中释放出来，并用DNase I消化，避免了基因组DNA污染。经硅基质膜纯化后可获得＞18nt的RNA，产物可直接用于RT-PCR、RTqPCR、生物芯片分析等下游实验。

产品特点：
·针对性强：专为提取FFPE中的miRNA设计，试剂盒组分进行特别优化；
·纯度高：柱法纯化，产物无gDNA和盐离子污染；
·简单快速：2h内即可获得高质量的miRNA。

提取流程图：


试剂盒组成：

组分	规格
裂解液RF	12ml
缓冲液RB	2×12ml
漂洗液RW	12ml
Proteinase K	500μl
RNase-Free ddH2O（瓶装)	15 ml
RNase-Free吸附柱CR3（含2ml收集管)	50套
DNase I	1500U
缓冲液RDD	4 ml
RNase-Free ddH2O（管装)	1 ml
RNase-Free离心管（1.5ml)	50个

储存条件：15-25℃，DNase I，缓冲液RDD和RNase-Free ddH2O（管装）置于2-8℃保存

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。）
1．次使用前应在漂洗液RW中加入无水乙醇，加入量请参见瓶上标签。
2．DNase I储存液的配制
  将DNase I干粉（1500U）溶解在550 μl RNase-Free ddH2O中，轻柔混匀，分装后-20℃贮存（可保存9个月）。
  注意：从-20℃融化后的DNase I储存液保存于4℃（可保存6周），不要再次冻存。

起始材料：
1．标准的福尔马林固定石蜡包埋程序也常常会造成核酸的片段化。为了尽量降低RNA片段化的可能性，应该按照以下操作步骤进行样本处理：
  组织切除后应尽快浸入4%-10%的福尔马林溶液中；
  固定时间zuì好为14-24 h（固定时间过长会导致RNA片段化更严重，不利于下游的试验)；
  样本包被之前必须彻底脱水。
2．应采用新鲜的FFPE组织切片，切片厚度不超过10μm，切片过厚可能会造成RNA得率低，每次制备采用的切片数应不超过8片，表面积应不超过250mm2。
3．如果没有起始样本的信息，建议初次制备采用的切片数应不超过2片，然后根据实验结果，下次制备采用的切片数可以进行调整，但应不超过8片。

操作步骤：

1．将石蜡样品切成5-10μm厚的片状。
  注意;如果样品表面暴露于空气中,zuì初的2~3片弃掉不用。
2．迅速将2-8张切片置于1.5 ml RNase-free的离心管中，加入1 ml二甲苯，剧烈涡旋10sec。
3．室温（15-25℃)，12000rpm （~13400×g)离心2min。
4．用枪头吸除上清，小心不要吸到沉淀。
5．加入1 ml无水乙醇于沉淀中，涡旋混匀。
6．室温（15-25℃)，12000rpm （~13400×g)离心2min。
7．用枪头吸除上清，小心不要吸到沉淀（用一个新的枪头小心吸出残余的乙醇）。
8．打开管盖，室温（15-25℃)或37℃放置10 min直至残余的乙醇挥发完全。
  注意：完全去除残余的乙醇很重要，残余的乙醇会对RNA产生影响。
9．加入150 μl裂解液RF以及10 μl Proteinase K于沉淀中，彻底涡旋混匀。
10．55℃孵育15 min之后80℃孵育15 min。
11．冰上放置3 min，12000rpm （~13400×g)离心15 min，转移上清至新的2 ml RNaseFree离心管中。
12．加入16 μl的RDD buffer和10 μl的DNase I溶液，颠倒混匀。室温放置15 min。简短离心以收集管壁及管盖上的液滴。
13．加入320 μl的缓冲液RB，涡旋混匀。
14．加入1120 μl的无水乙醇，涡旋混匀（可能会出现沉淀)。
15．转移700 μl溶液和沉淀入吸附柱CR3中（吸附柱放在收集管中），12000rpm（~13400×g)离心1 min，弃掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
16．重复步骤15，直到所有的溶液和沉淀完全通过吸附柱CR3，弃废液，将吸附柱CR3放回收集管中。
17．向吸附柱CR3中加入500μl漂洗液RW（使用前请先检查是否已加入乙醇），室温静置2min，12000rpm （~13400×g)离心30-60 sec，弃废液，将吸附柱CR3放回收集管中。
18．重复步骤17。
19．室温（15-25℃)，12000rpm （~13400×g)离心2min，倒掉废液。将吸附柱CR3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
  注意：此步骤目的是将吸附柱CR3中残余的漂洗液去除，漂洗液的残留，可能会影响后续的RT等实验。
20．将吸附柱CR3转入一个新的RNase-Free离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加30-100 μl RNase-Free ddH2O，室温放置2min，12000rpm （~13400×g)离心2min。
  注意：洗脱缓冲液体积不应少于30 μl，体积过小影响回收效率。RNA溶液请于-70℃保存。

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