特别提示:包括重组菌落鉴定试剂盒(PCR法)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:重组菌落鉴定试剂盒(PCR法)
英文名称:Recombinant co
lony PCR Identification Kit
产品货号:WH0198
产品规格:50次
本试剂盒包含一管便携式PCR MasterMix预混系统,无需您一一加入各种成分,直接加入筛选到的单菌落,经过1小时左右的PCR反应和电泳检测即可得到重组菌落鉴定的结果。
PCR法鉴定重组菌落。其原理主要是选择合适的引物,根据灵敏的PCR扩增反应,将阳性宿主菌体内载体的目的片段扩增出来,方便地进行鉴定,无需进行菌体的过夜培养和质粒提取,大大地节省了时间和精力。
产品特点:
方便快捷:省去了菌体培养和提取质粒的时间与费用,快速简便地鉴定重组子。
准确灵敏:鉴定的准确度达90%以上。
试剂盒组成:
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组分
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规格
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2×Taq PCR MasterMix
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500μl
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T7 primer(10μM)
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50μl
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SP6 primer(10μM)
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50μl
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ddH2O
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1ml
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保存条件:-20℃可长期保存,2×Taq PCR MasterMix多次冻融不会影活性。如需经常使用,可存放于4℃。
注意事项:
1.重组菌落鉴定时,挑取单菌落前,应先做好标记,便于鉴定后使用。
2.挑取菌落时,应选择单菌落,不要挑取太多菌体,以免影响PCR结果。
3.设定PCR程序时,请根据插入片段大小决定延伸时间,如果插入片段大小为1kb以下,延伸时间30sec即可,如果片段更长,可按此比例增加延伸时间。
操作步骤:
以下举例仅供参考,实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异,需根据实际情况,设定zuì佳反应条件。
1.按以下体系配好含有引物的PCR反应液。
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成分
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使用量
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T7 Primer(10μM)
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1μl
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SP6 Primer(10μM)
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1μl
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2×Taq PCR MasterMix
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10 μl
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ddH2O
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8 μl
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2.将过夜培养的平板上的菌落编号后,使用灭菌的牙签挑取一部分单菌落加入上述反应液,剧烈振荡使菌落充分分散到反应液中。
3.短暂离心收集管中的液体后,进行PCR反应。
4.PCR反应循环的设置:

注意:延伸时间请根据插入片段大小调整。
5.结果检测:反应结束后取5 μl反应产物,琼脂糖凝胶电泳检测。
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储存条件:低温运输,4℃保存,有效期两年。
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规格:1mL
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储存条件:低温运输,4℃保存,有效期两年。
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产品特点:
1. 简单,2×Tailing Buffer中含有所需要的所有成分,不需要单独准备。
2.适用于任何平末端的DNA片段,包括Pfu DNA polymerase等酶合成的DNA片段。
3.产物可以直接用于与T载体的连接。
试剂盒组成:
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成分
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规格
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Taq DNA polymerase(5U/μL)
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50μl
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2×Tailing Buffer
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1.25ml
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说明书
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1份
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储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
一:反应前纯化处理:
用Vent,Deep Vent,Pfu,Pwo等具有3 到5外切活性的DNA聚合酶扩增得到的DNA片段,必须经过彻底的去除残留的酶的处理过程(如酚/lǜ仿抽提或Proteinase K处理),否则它们将在加A反应时,切除掉加上的A尾巴,干扰反应。可以采取胶回收和酚/lǜ仿抽提法等常规方法纯化,zuì后溶解在水或TE中,终浓度以0.1μg/μL为宜。
二:加A反应
在干净的0.5mL或1.5mL离心管中,分别加入下列成分:
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回收的DNA片段
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0.2-2ug
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2×dA Tailing Buffer
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25μL
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Taq DNA polymerase(5U/μL)
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1μL
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补水到
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50μL
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72℃保温2小时
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三:反应后处理
加A反应后,Taq DNA pol

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货号
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名称
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规格
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BTN120513
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20次
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50 ng
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BTN90801B
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20次
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1g
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50次|200次
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