ALH335 平末端克隆试剂盒

平末端克隆试剂盒由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于科研试验，本品质量稳定，价位合理，需要平末端克隆试剂盒等克隆与表达产品的客户，请到我公司官网联系我们。

北京百奥莱博科技有限公司是一家专业的生物试剂销售公司。公司主要经营血清、抗原、抗体等生物试剂产品，可以为您提供专业的技术服务，以优良的价格、优质的服务、优先的理念，满足客户的各方面的需求，与国内多家企业、单位建立了良好的长期合作关系，拥有较好的企业信誉和品牌形象。 主营产品:血清、抗体、抗原、核酸提取、核酸纯化等生化试剂

特别提示：包括平末端克隆试剂盒(不含多克隆位点)(拓扑连接酶技术)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：平末端克隆试剂盒(不含多克隆位点)(拓扑连接酶技术)
英文名称：Zero Background TOPO-Blunt Cloning Kit (without MCS)
产品货号：ALH335
产品规格：20次|80次

本试剂盒和传统的T4连接酶原理不同，它利用了拓扑异构酶可以在瞬间（几秒钟-几分钟）、（接近）连接DNA片段的原理采用本公司独特的工艺制成。

本试剂盒在克隆插入位点两侧不含多克隆酶切位点，需要在PCR扩增引物上导入合适的酶切位点。此时如果使用PCR扩增引物导入的酶切位点进行DNA酶切时，酶切反应将不会受到T载体上其它多克隆酶切位点上的限制酶影响，可以大大提高酶切效率，增加亚克隆成功率。

试剂盒组份(20次)：
TOPO-Blunt Simple Vector(30ng/μl)————20μl
1000bp Control（40ng/μl）————5μl
10×Enhancer———————————20μl

产品特点：
1. 可以在瞬间（几秒钟-几分钟）完成连接。
2. 无需冰浴和热休克，室温5分钟内完成转化；无需1小时复苏，只需37℃10分钟复苏便可以涂板。从连接到涂板只需15-20分钟。
3. 无自连、零背景，无需繁琐蓝白斑筛选，见到长出的克隆便是有插入的（接近）。
4. 可以连接长达10kb片段（即使连接5kb片段，挑10个菌落，至少8个是有插入的），是目前上zuì简单、zuì快速、零背景免筛选的TOPO平末端克隆载体。

储存条件：-20℃，有效期12个月。

本制品别名：TOPO Blunt载体连接试剂盒

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货号	名称	规格
BTN81201	pression/BTN81201.html" target="_blank">酵母电转感受态细胞制备液	20次
BTN60206	pression/BTN60206.html" target="_blank">氨苄青霉素溶液	10mL
BTN120690	pression/BTN120690.html" target="_blank">红霉素溶液	10mL
YT001	pression/YT001.html" target="_blank">质粒小量抽提试剂盒	50次|200次
WE0251	pression/WE0251.html" target="_blank">0感受态细胞	100μl×10支
WE0252	pression/WE0252.html" target="_blank">DH5α感受态细胞	100μl×10支
WE0254	pression/WE0254.html" target="_blank">BL21(DE3)pLysS感受态细胞	100μl×10支

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名称：大肠杆菌JM110化学感受态细胞
货号：BTN130511
规格：10*100μl
 本产品是采用大肠杆菌JM110菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测本产品，转化效率可达106。本产品为dam-，dcm-的菌株，排除dam，dcm甲基化的影响。
 菌株基因型为：dam dcm supE44 hsdR17 thi leu rpsLlacY galK galT ara tonAthrtscΔ(lac-proAB)F-[traD36 proAB+ lacIq cZΔM15]

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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