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产品名称:大豆特异性基因Lectin单重凝胶PCR检测试剂盒
产品货号:SYA288
产品规格:48次/盒
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本试剂盒适用于检测植物中特异性基因Lectin,用于筛查待检测植物中是否含有Lectin基因片段DNA成分。其检测结果仅供参考。
本试剂盒用一对大豆特异性基因Lectin特异性引物,结合一条特异性荧光探针,用荧光PCR技术进行大豆特异性基因Lectin的检测。
试剂盒组成:
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组份
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数量
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规格
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Lectin反应液(Lectin-qPCR MIX)
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1管
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672μL/管
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|
酶混合物(Enzymes MIX)
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1管
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48μL/管
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|
阴性对照(NTC)
|
1管
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50μL/管
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|
Lectin阳性对照(Lectin-PTC)
|
1管
|
50μL/管
|
储存条件:-20℃,应避免反复冻融,有效期12个月。
使用方法:
一、
样品采集及处理:
?适用标本类型:植物组织及其加工制品。
?样本采集:称取200g样品。
二、
DNA提取:
样品需用粉碎机或冷冻研磨仪研磨至细粉末状。
用户可采用SN/T2584-2010中推荐的方法提取DNA,也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的植物基因组DNA提取试剂盒(过柱法)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5μL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议zuì后在样品制备区域加入阳性对照。
三、
检测步骤:
1.PCR扩增
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(Lectin-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),室温融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
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试剂
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每个反应加入的量
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N个反应加入的量
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荧光PCR反应液
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14μL
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N×14μL
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酶混合物
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1 μL
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N×1μL
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|
总量
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15μL
|
N×15μL
|
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(Lectin -PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
2.
qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件:
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|
1循环
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50℃ for 2 min
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预变性
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1循环
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95℃ for 10 min
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PCR扩增
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40循环
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95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
|
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM,淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
四、
结果分析:
1.
结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的zuì高点为准。
2.
试验成立判定
?阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线。
?阳性对照(Lectin -PTC):均产生扩增曲线。
?以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
3.
结果判定
?在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明Lectin核酸阳性。
?Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明Lectin核酸阴性。
?如果35<Ct值≤40,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
?对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行Lectin qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明Lectin核酸阳性;否则判为样本阴性。
五、
注意事项:
?初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
?所有使用的离心管应高压灭菌,而且必须不含DNA酶。
?PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
?样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
?试剂盒里所有物品应视为污染物对待,按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

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