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更新时间:2024-09-23
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马(先生) 经理
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高柱容量、高分辨率 |
高容量、高分辨率
体积排阻色谱中,填料的孔体积决定了色谱柱的zui高容量。孔体积越大,柱容量就越高,分离效果也越好。赛分科技精心设计的SRT固定相具有大的孔体积,例如SRT SEC-150、300、500孔体积为1.3 ~ 1.5 mL/g,而SRT SEC-100、1000、2000的孔体积为1.0 ~ 1.1 mL/g。下图显示与竞争对手T的SEC柱相比,SRT SEC-150柱具有许多优点。先,SRT柱比T柱具有更高的分离容量。对于SRT柱和T柱,从全渗透峰 (尿嘧啶) 到全排阻峰 (甲状腺球蛋白) 之间的洗脱体积分别为6.7 mL和6.17 mL。其次,SRT柱比T柱具有更高的分辨率。图中聚-DL-丙氨酸为一种缩氨酸,平均分子量为1 ~ 5 kD (Sigma)。根据经验可知,体积排阻色谱柱中能达到基线分离的两种物质其平均分子量必须相差两倍以上。SRT SEC-150可以很好地分离核糖核酸酶A (13.7 kD) 和聚-DL-丙氨酸,而T柱则不能实现基线分离。另外,SRT柱分离聚-DL-丙氨酸的峰形表明其对聚-DL-丙氨酸没有非特异性作用。反之,T柱分离聚-DL-丙氨酸时的峰形变宽和拖尾现象则说明该柱固定相与样品之间存在某些非特异性结合作用。
高载量
上样量是体积排阻色谱分离与纯化的重要指标。从下图可以看到,以BSA作为目标分子,赛分SRT分析柱的上样量可以超过500 μg,说明其具有高载量的特点。
的批间重现性
SRT SEC固定相的合成采用可控的表面化学修饰技术,其表面涂层高度重现,使得填料批次与批次之间有着良好的重现性,加之严格的装柱工艺控制,确保了不同批次色谱柱之间的保留时间的差异在5%以内。下图是蛋白标准混合样品在3个不同批次SRT SEC-150柱上分离得到的结果。其中核糖核酸酶A的保留时间差异zui大,但也在2%以内。
优异的稳定性
SRT SEC固定相表面具有一层密的亲水、中性聚合物薄膜,可以阻止流动相接触薄膜内侧,防止薄膜脱落,即使在高流速下也能保持高的稳定性。
SRT SEC固定相在pH 2.0到8.5之间均具有高的稳定性。下图表明,在用700柱体积的磷酸缓冲液 (pH 8.5)冲洗后,SRT SEC-300的固定相几乎没有改变。
SRT SEC固定相可用于多种缓冲体系,如醋酸铵、磷酸盐、Tris等。当用150 mM的磷酸缓冲液 (pH 7.0)作为流动相时,在45天内进样100次保留时间的偏差在5%以内。SRT SEC固定相可在高盐浓度,如2.0 M下使用。另外,SRT SEC柱在有机溶剂如甲醇、乙醇、THF、DMF、DMSO等中也可使用。
高蛋白回收率
SRT SEC固定相为中性亲水固定相。蛋白和其他生物分子与SRT柱固定相之间几乎没有非特异性相互作用。蛋白不会吸附到硅胶基质表面,因此SRT色谱柱对蛋白具有高的回收率,且能保持很好的活性。例如,在分离酸性蛋白BSA以及碱性蛋白溶菌酶的过程中样品回收率大于95%。
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