人癌症促凝素（CP）elisa试剂盒

陕西现货人癌症促凝素（CP）elisa试剂盒切割标本后，称取1g组织，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。

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陕西现货人癌症促凝素（CP）elisa试剂盒

样本处理方法汇总表

 

一、液体样本

        液体样本处理原则：所有的液体样本，用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），如果以后碰到其他的液体样本，也按这个方法，纳入汇总表。

1、血清：用无菌管收集，室温血液自然凝固10-20分钟，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2、血浆：应根据标本的要求选择EDTA、肝素钠或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3、尿液：用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

4、胸腹水：用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5、脑脊液：用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。(（采集大鼠脑脊液）的方法：采集脑脊液时，用湿纱布擦试大鼠颈背部皮肤，剪去背毛暴露皮肤。两耳连线剪一横切口((1. 5cm左右)，在其中点向尾侧沿皮下剪开2cm，将皮分离两侧，扩大视野。紧贴大鼠头骨依次逐层剪切各肌层，并断端依次拉向尾侧扩大视野。注意，有出血时用干纱布按压止血，保持术口清晰。接近颈后黄韧带时，小心地用7号注射针头分离附盖的肌肉，暴露寰枕膜。用lml注射器(针头用止血钳使针尖与针体成150度钝角)，针斜面向上，针近水平刺入蛛网膜下腔，固定针体，缓慢抽取脑脊液，一般采集量为100-200微升。)

6、唾液：用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

7、细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。人 白介素17受体 IL-17R 100 pg/mL
人 白介素-18结合蛋白 IL-18BP 200 pg/mL
人 白介素18受体 IL-18R 240 pg/mL
人 白介素1β转换酶 ICE 240 pg/mL
人 白介素1家族成员10 IL1F10 120 pg/mL
人 白介素1可溶性受体Ⅱ IL-1sRⅡ 200 pg/mL

8、牛奶：用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

9、蜂蜜：用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

10、全血：用含有抗凝剂的无菌管收集，立即轻轻摇动，来回轻轻颠倒数次，使血液和抗凝剂混匀，以防血液凝固。

 

 

二、固体样本

        固体样本处理原则：称取1g的固体样本，用9g的合适缓冲液溶解，分泌蛋白可以直接离心取上清检测，细胞内的蛋白，要先收集细胞，再用合适方法破碎，离心取上清测试。

1、组织标本：切割标本后，称取1g组织，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清。分装一份待检测，其余冷冻备用，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。对于植物组织，不好匀浆的话，就在液氮中充分研磨；

2、细胞内蛋白样本

许多待测蛋白不是分泌蛋白，而是存在于细胞内的蛋白，这个时候，要先收集细胞，洗涤干净，再破碎细胞，离心取上清。

（1）培养的细胞

A、动物细胞：用PH7.2-7.4的PBS稀释细胞悬液，使细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融（如果反复冻融，破碎效果不好，就采用超声波破碎），以使细胞破坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

B、植物细胞：用PH7.2-7.4的PBS稀释细胞悬液，使细胞浓度达到100万/ml左右，置于冰盒上，用超声破碎仪，设置破碎2s，冷却30s的方式，充分破碎细胞，以使细胞破坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（2）组织的细胞

切割标本后，称取1g组织，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），去除上清，再用pH7.2-7.4左右的PBS小心洗涤沉淀的细胞三遍。再用上述的细胞破碎方法破碎细胞。

3、土壤：称取1g土壤，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工将标本充分混匀。2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清。分装一份待检测，其余冷冻备用，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。如果是测分泌蛋白，直接取上清检测，测试细胞内蛋白，要破碎细胞。

4、咽拭子：加入2g的pH7.2-7.4左右的PBS，溶解咽拭子头部，摇匀，用镊子取出咽拭子并挤干液体，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清。分装一份待检测，其余冷冻备用，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。如果是测分泌蛋白，直接取上清检测，测试细胞内蛋白，要破碎细胞。

5. 植物标本的精采集及保存 
1、 称取0.1g（误差±3%以内）新鲜植物组织样本，在液氮中充分研磨；
2、 加入1ml的提取液（80%甲醇）, 置于-20度过夜；
3、 于4度，8000rpm，离心1小时，取上清；
4、 上清液过C-18固相萃取柱。具体步骤是： 80%甲醇（1ml）平衡柱→上样→收集样品→移开样品后用甲醇（5ml）洗柱→乙*（5ml）洗柱→甲醇（5ml）洗柱→循环。过柱后的样本真空干燥或氮气吹干，保存备用；
5、 上样前加入pH7.4 PBS缓冲液（1ml定容）。混匀后室温放置30分钟，然后4度离心（8000rpm，15分钟），取上清并暂时保存于4度待用。

 

6.植物标本中相关酶或蛋白的测定：（粗提取）
1、 新鲜植物组织请在液氮中充分研磨；
2、 加入样品体积9倍的提取液（pH 7.4 PBS缓冲液）,3、 请于4度，8000rpm，离心30分钟，取上清并暂时保存于4度待用。

 

 

三、样本收集注意事项陕西现货人癌症促凝素（CP）elisa试剂盒

1、不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

2、标本采集后尽快进行实验，若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。陕西现货人癌症促凝素（CP）elisa试剂盒

3、我们罗列的是通用的样本处理方法，无法涵盖各种样本，对于一些特殊样本，建议实验人员多参考已发表的文献，自行设计合理的样本处理方法。陕西现货人癌症促凝素（CP）elisa试剂盒

 

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