96T人抗内因子抗体(IFA)ELISA试剂盒

发布日期：2013-01-10 浏览次数 ：729

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    96T人抗内因子抗体(IFA)ELISA试剂盒使用说明书 

本试剂盒仅供研究使用公司实验室提供代测，7个工作日出结果，提供原始数据！

检测范围：每种的检测范围都有所不同,具体请查看说明书 

特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的指标，且与其他相关蛋白无交叉反应。 

有效期：6个月 

预期应用：ELISA法检测指标血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中含量或灵敏度。 

96T人抗内因子抗体(IFA)ELISA试剂盒 实验原理 

用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗指标抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗指标抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的指标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。 

试剂盒组成及试剂配制 

1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。 

2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。 

3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。 

4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。 

需要而未提供的试剂和器材 

1. 标准规格酶标仪 

2. 高速离心机 

3. 电热恒温培养箱 

4. 干净的试管和Eppendof管 

5. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，用多通道移液器 

6. 蒸馏水，容量瓶等 

96T人抗内因子抗体(IFA)ELISA试剂盒 生物素标记抗体的稀释原则： 

临用前以生物素标记抗体稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。 

辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则： 

临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。 
1. 酶联板（Assay plate ）：一块（96孔）。 

2. 标准品（Standard）：2瓶。 

3. 样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。 

4. 生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。 

5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。 

6. 生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100） 

7. 辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100） 

8. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。 

9. 浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 

10. 终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。 

96T人抗内因子抗体(IFA)ELISA试剂盒 操作步骤 

实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。 

1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。 

为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 

2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl（取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。 

3. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，200μl/每孔，甩干。 产品名中文（英文）酶联免疫吸附测定试剂盒

4. 每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物素标记抗体工作液） 100μl，37℃，60分钟。 

5. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，200μl/每孔，甩干。 

6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔显色不明显，即可终止）。 

7. 依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。 

8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。 在加终止液后15分钟以内进行检测。