HaCaT细胞@ATCC细胞@人永生化表皮细胞

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细胞名称	HaCaT细胞
细胞形态图200×
细胞来源	人皮肤
细胞简介	HaCaT细胞为人永生化表皮细胞，来源于人皮肤，中文名为人永生化表皮细胞，正常的细胞形态为上皮样，贴壁生长。
培养基	DMEM 90%, Fetal Bovine Serum 10%
培养条件	37℃ 5% CO2
消化条件	0.25% (w/v) Trypsin-0.53 mM EDTA溶液，消化5-10min
传代比例	1：4-1：10
换液时间	2-3天换液一次
冻存液比例	80%培养基，10%FBS, 10% (v/v) DMSO
冻存密度	1-3 ×10 6/管，液氮保存

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HaCaT细胞@ATCC细胞@人永生化表皮细胞 一、细胞的冻存:为避免污染造成的损失，zui小化连续细胞系的遗传改变和避免有限细胞系的老化和转化，需要冻存哺乳细胞。冻存细胞前，细胞应该特性化并检查是否污染。

有几种普通培养基用来冻存细胞。对于包含有血清的培养基，成分可能如下：

◆包含10%甘油的完全培养基，

◆包含10%二甲基亚砜(DMSO)的完全培养基，

◆50% 细胞条件培养基和50%含有10%甘油的新鲜培养基，或

◆50% 细胞条件培养基和50%含有10%二甲基亚砜的新鲜培养基。

对于无血清培养基，一些普通的培养基成分可能是：

◆50% 细胞条件无血清培养基和50%包含有7.5%二甲基亚砜的新鲜的无血清培养基，或

◆包含有7.5%二甲基亚砜和10%细胞培养级BSA的新鲜无血清培养基。

HaCaT细胞@ATCC细胞@人永生化表皮细胞1.悬浮细胞

●计数将要冻存的活细胞。细胞应该处于对数生长期。以大约200～400g离心5分钟沉淀细胞，使用移液管移去上清到zui小体积，不要搅乱细胞。

●以1×107到5×107细胞/ml密度，在包含有血清的冷冻培养基中再次悬浮细胞，或者以0.5×107到1×107在无血清培养基中，再次悬浮细胞。

●分装进冻存管，将冻存管置于湿冰上或放入4℃冰箱中，5分钟内开始冷冻步骤。

●细胞以1℃/分钟进行冷冻，可以通过可编程序的冷冻器进行或者把隔离盒中的冻存管放到-70℃到-90℃的冰箱中，然后转移到液氮中贮存。

HaCaT细胞@ATCC细胞@人永生化表皮细胞2.贴壁细胞

●使用分离试剂从基层分离细胞，分离时尽可能温和，使对细胞的损伤减少到zui小。

●在完全生长培养基中，再次悬浮分离细胞，确定有活力细胞数。

●以大约200g离心5分钟沉淀细胞。使用移液管移去上清到zui小体积，不要搅乱细胞。

●以5×106到1×106细胞/ml密度，在冻存液中悬浮细胞。

●分装进冻存管，将冻存管置于湿的冰上或放入4℃冰箱中，5分钟内开始冷冻步骤。

●细胞以1℃/分钟进行冷冻，可以通过可编程序的冷冻器进行或者把隔离盒中的冻存管放到-70℃到-90℃的冰箱中，然后转移到液氮中贮存

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