CHO-pt细胞，转血小板基因仓鼠卵巢细胞

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一个合格的质粒含有以下组成部分：

复制起始位点Ori：即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点，而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。

抗生素抗性基因：可以便于筛选或检测，如Amp+ 、Kan+。

多克隆位点MCS：克隆携带外源基因片段。

P/E：启动子/增强子。

Terms：终止信号。

加poly(A)信号：可以起到稳定 mRNA 作用。

如何阅读质粒图谱：

一步：先看 Ori 的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒）。

第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。

--Ampr 水解β-内酰胺环，解除氨苄的毒性；

--tetr 可以阻止四环素进入细胞；

--camr 生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性；

--neor(kanr) 氨基糖苷磷酸转移酶 使G418（长那霉素衍生物）失活；

--hygr使潮霉素β失活。

第三步：看多克隆位点（MCS）。它具有多个限制酶的单一切点，便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，从而便于筛选。MCS决定了能不能放置目的基因以及如何放置目的基因。

第四步：再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA片段。一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。

第五步：是否含有表达系统元件，即启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号，这是用来区别克隆载体与表达载体。在克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用哪种载体，要以实验目的为依据。

启动子：促进DNA转录的DNA序列，这个DNA区域常在基因或操纵子编码顺序的上游，是DNA分子上可以与RNApol特异性结合并使之开始转录的部位，但启动子本身不被转录。

增强子/沉默子：增强子为真核基因组（包括真核病毒基因组）中的一种具有增强邻近基因转录过程的调控序列，其作用与增强子所在的位置或方向无关（即在所调控基因上游或下游均可发挥作用）。/沉默子：负增强子，负调控序列。

核糖体结合位点/起始密码/SD序列（Rbs/AGU/SDs）：mRNA有核糖体的两个结合位点，对于原核而言是AUG（起始密码）和 SD序列。

转录终止顺序（终止子）/翻译终止密码子：结构基因的后一个外显子中有一个 AATAAA的保守序列，此位点down-stream有一段GT或T富丰区，这2部分共同构成poly(A）加尾信号。

为什么质粒图谱上有的箭头顺时针有的箭头逆时针？那其实是代表两条DNA链，即质粒是环状双链 DNA，它的启动子等在其中一条链上，而它的抗性基因在另一条链上。

如何选择载体

把目的基因通过基因工程手段送到生物细胞（受体细胞），需要运载工具（交通工具）携带外源基因进入受体细胞，这种运载工具就叫做载体（vector）。基因工程所用的vector实际上是用来携带目的基因片段进入受体细胞的 DNA。

选择载体主要依据构建的目的，同时要考虑载体中应有合适的限制酶切位点。如果构建的目的是要表达一个特定的基因，则要选择合适的表达载体。

产品名称：CHO-pt细胞，转血小板基因仓鼠卵巢细胞

中文名称：转血小板基因仓鼠卵巢细胞

来源：

种属：仓鼠

生长状态：贴壁生长|悬浮生长|半贴壁

细胞形态：上皮样|成纤维样|圆形|球形|梭形|不规则形态

质控：无支原体、无污染|符合标准

周期：冻存细胞3-4个工作日发货，复苏细胞1-2周发货

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CHO-pt细胞，转血小板基因仓鼠卵巢细胞细胞吹打经验之谈：

急速的反复吹打肯定容易产生泡沫，这对细胞不利，所以我们要尽量避免。在操作时尽量选用较大口的吸管，吸液时先将吸管内空气排空，再深入液面以下吸液，吹打细胞时，尽量沿着壁吹出液体，操作轻柔，就可zui大程度避免泡沫的产生！

1.有一些细胞可以不用消化液就能够吹打下来。个人认为能不用消化液是的。譬如巨噬细胞。一直维持巨噬细胞，每次传代都不用消化液，吹打的时候一般会用瓶内未换的剩余旧培养液，这样比用新的培养基可以减少点泡沫的生成。当然这个一定要求原培养基未被污染。

2. 吹打的时候我们都知道要一点挨着一点吹，这样不会漏掉地方。而每次都会先沿着两条对角线的方向吹打，然后再按照横着或者是竖着吹打。这样就可以比较容易把细胞吹下来，因为先细胞的各个方向都受力了，而且比较均匀，细胞比较容易下来，而且对细胞形态的维护比较好。

3.对胶头滴管的要求。胶头滴管头部是做成弯曲45度角的形状，一般都是自己用止血钳夹住头部在酒精灯上烧弯。发现，如果吹打的时候，滴管的头部边缘如果是和吹打平面平行的话，反而容易产生泡沫，贴在底部吹，也容易产生泡沫，是能够有一个角度顺着你吹打的方向和滴管一致。并且稍微远离吹打面，这样滴管内的液体容易流出，阻力会减小，就不会产生那么多的泡沫了。

4.控制吹打的节奏，急速地吹打会很快地产生泡沫，用力越大，越容易产生。是能够把握住自己的力度和节奏，有条不紊的吹打。是以自己拿滴管用手的轻松程度为准，如果刚吹几下很快就累的话，那就证明是节奏过快。吹完都不累的话那就是太慢力度也不够。一般在吹完一遍时指头发困会比较好。这样的节奏能够比较快速而且有效地完成。

觉得关键的操作是不要吹打到底。

培养细胞多年，避免气泡产生要注意以下两点：

1 吹打用的培养基不能太少，如果只有1-2mL，气泡难以避免；

2 吸管每次打出液体后立刻深入液面下吸取液体。

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