BEL-7402细胞|素尔|科研用人肝癌细胞株

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BEL-7402细胞|素尔|科研用人肝癌细胞株,一时间要镜检:观察细胞形态是否正常,对于贴壁细胞则要注意看贴壁情况是否很好 ,观察细胞密度,有疑议及时咨提供细胞的技术人员。 由于运输的时间或者温度的变化,很多贴壁细胞在盛满培养基的瓶子里生长的状态和平时会有点不一样,主要是贴壁牢固问题。比如293T,平时贴壁就不是很牢,在装满的培养基瓶子里面,会发生大片的脱落,细胞聚集在一起,但是细胞生长还是正常的,通过离心收集,加以胰酶的消化,重新打散,又可以正常的贴壁生长。
BEL-7402细胞|素尔|科研用人肝癌细胞株 当通过上一步的观察,细胞初步没有任何问题时,进行下一步操作。当收到的细胞密达到80%左右时,则处理如下:弃除瓶中大部分培养基,仅保留5到10mL培养所需的常规培养基;或更换新鲜的培养基,置于培养箱中,随后每天观察。 细胞在低于正常生长温度情况下,会调整为静止期,或者慢速生长期,必须恢复37度的环境至少3个小时左右,才能重新调整到接近对数生长期的状态,在对数生长期进行细胞的传代会大大增加传代的成功率,和细胞的存活率。
BEL-7402细胞|素尔|科研用人肝癌细胞株 如果经一步观察发现细胞密度超过90%,并且细胞状态很好时,则复温后2个小时需要立即传代。传代的比例应依据不同的细胞而定。对于生长比较快,状态稳定,不易受外界影响的细胞可以一次多传几瓶;对于生长较慢,细胞比较薄,状态容易波动的细胞类型,一次少传些,保证每瓶细胞密度大些,便于稳定生长。至于一些比较陌生的细胞,一次处理也可以依照第二种情况。
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胰酶消化的程度是一个关键:消化过度则对细胞的活性影响较大,并有部分细胞漂浮,随弃去的胰酶流失;消化不足则细胞难于从瓶壁上吹下,反复吹打同样也会损伤细胞活性。影响消化速度的因素较多,主要有胰酶溶液的活性(配制条件、冻存或4℃保存时间长短、是否反复冻融、解冻后存放时间及温度等)、消化时的温度(气温、细胞培养瓶及胰酶溶液的温度)以及所加胰酶溶液的多少等。含有EDTA的胰酶会比不含的消化能力强很多,不同细胞对消化液的敏感性也不同,BEL-7402细胞|素尔|科研用人肝癌细胞株 ,消化时间仔细去摸索一下,每过2分钟镜下观察细胞是否变圆,记录消化时间,下一次操作参考之前的记录来控制时间即可。对于悬浮细胞换液时只需要补液就行。
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