在细胞培养过程中，经常少不了HEPES缓冲液。那么，HEPES缓冲液的配制和使用方法怎样呢?HEPES缓冲液是一种弱势，在开放式的培养条件中，若加入HEPES，可防止培养基内pH氧化升高，从而将PH维持在7.0左右。 HEPES分子量为238.31，化学名：4-羟乙基哌嗪乙磺酸，分子式: C8H18N2O4S。 HEPES常用于生物缓冲剂，pH值缓冲范围：6.8-8.2，用在生化诊断试剂盒、DNA/RNA提取试剂盒及PCR诊断试剂盒里。

　　HEPES使用方法有两种：

　　(1)HEPES可按所需的浓度直接加入到配制的培养液中，再过滤除菌。每1000ml培养液中加入2.38克HEPES，待溶后用lN NaOH 调pH至7.2，滤过除菌后使用。此时HEPES的使用浓度为10 mmol/L。

　　(2)亦可配成 100 x 贮存液(l mol/L)，使用前取 99ml培养液加入 lml贮存液，终应用浓度仍为10mmol/L。l mol/L(100 x)HEPES贮存液配制方法：取23.8g HEPES溶于90ml双蒸水中，用lN NaOH调pH至7.5一8.0，然后用水定容至100ml，过滤除菌，分装小瓶(2ml/瓶)，4℃或-20℃保存。

　　需要注意的是，HEPES缓冲液的使用终浓度为10-50mmol/L，对细胞性作用。一般情况下，浓度为20mmol/L的HEPES即可达到缓冲能力。现在市售HEPES为约10g包装的小瓶，大家根据实际情况正确灵活配制就OK了