RNA建库试剂盒上线,谁才是真正的幕后玩家
发布时间:2019-07-18浏览次数:1060返回列表
RNA建库试剂盒产品,适合于illumina测序平台,试剂盒中的每种组分都经过了严格的质量控制。
建库流程
利用oligo dT磁珠,从总RNA纯化得到mRNA,经过片段化(300bp左右)、合成一链和二链cDNA,再通过末端修复、加A、连接接头和PCR富集得到zui终的cDNA文库。
Tips:RNA样品检测的4种主要方法
(1) 琼脂糖凝胶电泳分析RNA降解程度以及是否有污染
(2) Nanodrop检测RNA的纯度(OD260/280比值)
(3) Qubit对RNA浓度进行定量
(4) Agilent 2100检测RNA的完整性
适应范围
样本种类:动、植物及真菌等真核生物的总RNA
建库起始量:100ng-1.5μg,推荐RNA RIN值≥7
插入片段:150bp-200bp或250-300bp
注:以1.5µg小鼠总RNA为起始模板,caliper检测文库大小分布情况,主峰值在408bp左右
温馨提示:
(1)RNA纯化在室温条件下操作,RNA样本稀释后冰上放置,并尽快进入下一步实验,避免RNA发生降解;
(2)RNA打断条件以及后续片段筛选需要严格按照sop进行,否则会影响文库大小及产量;
(3)试剂盒中的产品组分,不可拆分,不可与其他品牌同种试剂配套使用,否则影响建库结果。
RNA建库试剂盒注意事项
1、试验前请仔细阅读本说明书,注意每个组分的保存温度,确保实验顺利完成。
2、Stranded Oligo需-80℃保存,使用时少量分装使用。
3、操作过程请注意避免核酸样品和产物之间的交叉污染。
4、请使用不含RNA酶或DNA酶的枪头、EP管进行试验。
5、建库所使用的RNA必须是纯化后质检合格的样本,否则会严重影响建库结果;
6、实验所用磁珠应提前30分钟自4℃环境中取出,平衡至室温。所有磁珠操作均需置于室温。
7、80%乙醇需现配现用,用其清洗磁珠后,需清除干净,避免对后续反应产生影响。
建库流程
利用oligo dT磁珠,从总RNA纯化得到mRNA,经过片段化(300bp左右)、合成一链和二链cDNA,再通过末端修复、加A、连接接头和PCR富集得到zui终的cDNA文库。
Tips:RNA样品检测的4种主要方法
(1) 琼脂糖凝胶电泳分析RNA降解程度以及是否有污染
(2) Nanodrop检测RNA的纯度(OD260/280比值)
(3) Qubit对RNA浓度进行定量
(4) Agilent 2100检测RNA的完整性
适应范围
样本种类:动、植物及真菌等真核生物的总RNA
建库起始量:100ng-1.5μg,推荐RNA RIN值≥7
插入片段:150bp-200bp或250-300bp
注:以1.5µg小鼠总RNA为起始模板,caliper检测文库大小分布情况,主峰值在408bp左右
温馨提示:
(1)RNA纯化在室温条件下操作,RNA样本稀释后冰上放置,并尽快进入下一步实验,避免RNA发生降解;
(2)RNA打断条件以及后续片段筛选需要严格按照sop进行,否则会影响文库大小及产量;
(3)试剂盒中的产品组分,不可拆分,不可与其他品牌同种试剂配套使用,否则影响建库结果。
RNA建库试剂盒注意事项
1、试验前请仔细阅读本说明书,注意每个组分的保存温度,确保实验顺利完成。
2、Stranded Oligo需-80℃保存,使用时少量分装使用。
3、操作过程请注意避免核酸样品和产物之间的交叉污染。
4、请使用不含RNA酶或DNA酶的枪头、EP管进行试验。
5、建库所使用的RNA必须是纯化后质检合格的样本,否则会严重影响建库结果;
6、实验所用磁珠应提前30分钟自4℃环境中取出,平衡至室温。所有磁珠操作均需置于室温。
7、80%乙醇需现配现用,用其清洗磁珠后,需清除干净,避免对后续反应产生影响。






