在使用血清的时候，我们总是会遇到各种各样的问题，那么血清的十个操作问题，您遇到了几个呢？
一、为什么要热灭活血清?
加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。
在免疫学研究，培养ES细胞、平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。
二、如何选择适合的血清?
一致认为HYCLONE的血清是zui好的，但是根据我在北美的经历，国外一般认为GIBCO比HYCLONE好，所以并不是价格决定质量，但是总的来说这两种价格普遍偏贵，一般不是太娇气的细胞，国产的就够用了。此外，由于HYCLONE，GIBCO并没有生产线，我们只能从代理商那里买，而代理商又鱼龙混杂，所以买到假货的可能性也很大。所以，我一般会从直销员那里买血清，有的国外生物公司由于刚刚进入，知名度不高，但是其实在国外已经做得很不错了，如Wisent等，他们在有办事处，我会从那里拿，血清的品质和HYCLONE不相上下，但价格相对优惠很多。
三、 如何避免血清中产生沉淀?
如下操作可避免沉淀的产生：
1、解冻血清时，请随一边解冻，一边摇匀，使温度及成分均一，减少沉淀产生。
2、血清分装冻存时，规则摇均（小心勿造成气泡），使温度与成分均一。
3、勿直接由-20℃直接至37℃解冻，因温度改变太大，易使蛋白质凝结而发生沉淀。
4、勿将血清置于37℃太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏，从而影响血清品质。
5、血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，无须做此步骤。
6、若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且一边热灭火，一边摇匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。
四、血清中包含絮状沉淀，它们是什么，怎么处理?
沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性，不会影响品质。
如要除去沉淀，离心（400g，1-2分钟）或让其沉淀在瓶子底部，将血清小心的转移到另一无菌瓶中（一般不建议采用过滤的方法除去沉淀，因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤）。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。
所以，使用时摇动并加热血清至37℃，沉淀会自然消失。
五、 培养基中添加了血清和抗生素后，可长期保存吗?
一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。
因为抗生素和血清中的一些成分在解冻后就开始降解。
六、有必要做热灭活吗?
热灭活血清对大多数的细胞而言是不需要的。
经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。
而经热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。
若非必须，可以不需要做热处理这一步。不但节省时间，更确保血清的质量!
七、小牛血清和胎牛血清有何区别与注意事项?
来源不同：胎牛血清(Fetal Bovine Serum，FBS) 是在屠宰怀孕母牛的时候,通过心脏穿刺采血获取的胎牛的血清，新生牛(小牛)血清(Calf serum，CS)采自出生10至14 天的小牛。
各成分占比不同：两者所含的促细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组份与比例不同，用途与用法不同：某些细胞必需胎牛血清才能生长，而有些细胞只需小牛血清即可，使用浓度不同，一般在5%-10%，有特殊要求的浓度在20%。
血清保存和使用须注意：血清应保存在-5℃至-20℃，若存放在4℃不可超过一个月。解冻血清时 ，应先将血清至于2-8℃，并经常摇匀使之溶解，然后至室温放置使之升温，不可将冷冻的血清直接放入37℃水浴或者温箱中，如放在37℃解冻，颜色加深，粘稠度也会增加，血清在解冻和热灭活后，应按用量分装并于-20℃保存，避免反复冻融。
八、细胞培养中出现黑点是污染吗?如何处理?
一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成，先，要肉眼观察培养基是否混浊。
然后，在镜下观察培养细胞生长的状态，黑点是否游动。
如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。
如果在镜下观察细胞，生长状态良好，与黑点出现前相比，没有任何变化，那么，黑点的出现可能与以下几种情况有关：
1、细胞生长过老，破碎的细胞残骸;
2、血清质量不好，反复冻融的结果;
3、配制培养基的pH值偏高，不宜细胞生长;
4、配制培养基的水质、容器不合格。可用离心、过滤的方法去除这些黑点;
5、培养原代细胞中出现小黑点，可能是原代组织中的杂质，多次传代可以消除。
九、如何储存和解冻血清不会使血清品质受损?
将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃使之融解，然后在室温下使之全融。
但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。
长时间储存在2-8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。
因此，推荐在-20℃以下储存血清，并避免反复冻融。若存放于4℃时，请勿超过1个月。
若一次无法用完一瓶，建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。
十、 细胞培养中如何防止黑点生成?
1、尽可能地减少血清冻融次数。
2、培养基无需37℃水浴。
3、培养基保持zui佳PH值7.0- 7.2。
4、 严格控制配制培养基的水质，容器定期刷洗。
5、掌握细胞传代的zui佳时机，细胞切勿生长过老。