导读：在实验室，对植物ＥＬＩＳＡ试剂盒准备一般不太注意，通常的做法是，在实验时将试剂从冰箱中拿出来即用，而忽略了这种做法有可能影响后面温育时间不够的问题，其直接的后果是对一些弱阳性标本的检测出现假阴性。所以我们一定要做好植物ＥＬＩＳＡ试剂盒在使用前的准备工作。
因此，在ELISA测定中试剂的准备为关键的是，在实验开始前，将试剂盒先从冰箱中拿出来，在室温下放置20min以上后，再进行测定，以使试剂盒在使用前与室温平衡。这样做的目的，主要是为了在后面的温育反应步骤中，能使反应微孔内的温度较快地达到所要求的高度，以满足测定要求。其次，目前的商品ELISA试剂盒中的洗板液均需在实验室使用时对所提供的浓缩液稀释配制，因此稀释时所用的蒸馏水或去离子水应保证质量。
此外，当试剂盒以OPD为底物时，则底物溶液应在反应显色前临时配制。
1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。
2. 洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。
3. 一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线，做好复孔。
5. 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请后乘以稀释倍数。
6. 在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。
7. 底物请避光保存。
8. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。
植物ＥＬＩＳＡ试剂盒试验的原理好像很简单，不外乎固定抗原，增加一抗、二抗和底物，间中夹杂着洗刷和关闭。然而，即使是平铺直叙的洗刷和关闭，假如做得不太好，也有或许毁了全部试验。在试验结束时，咱们是否能获得有意义的信息，这在很大程度上取决于成果的信噪比。布景噪音会影响您对成果的判别。
洗刷很主要
洗刷过程看似很无聊，本来很主要，由于假如未联系的资料(如非特异联系的抗体或检查试剂)残留在微孔板中，那么它会增加布景噪音。如有必要，可增加洗刷液中的盐浓度，这会阻止非特异联系反应。假如布景过高，而您置疑洗刷不行时，能够测验增加洗刷次数。
关闭更关键
关闭液的作用是让不相关的蛋白占有微孔板中潜在的联系位点。这就下降了可发作信号的抗体非特异联系的时机。您当然也期望抗体只与意图蛋白联系吧。假如您的布景过高，置疑关闭不充分，那么您能够测验运用更高浓度的关闭液，或恰当延伸关闭时刻。
假如您一直被布景疑问所困扰，ELISA试剂盒那么或许您该花些时刻来优化关闭液。这或许需求时刻，但也是值得的。现在主要有两种类型的关闭液：蛋白和非离子型去污剂。您运用的类型须取决于多个要素，包含微孔板的外表试剂、吸附的抗原、您的抗体和检查试剂。好的关闭液应下降非特异性联系，但它不应当与抗原、抗体或检查试剂发作相互作用。
常用的非离子型去污剂是Tween-20。这种关闭液、安稳，在去掉洗刷过程中的一些非特异联系上很有用。但它们只在存在时起作用，由于很简单被洗掉。因而一切洗刷液中也有必要增加关闭液。请勿运用高浓度(正常浓度为0.01-0.1%)，它会下降特异联系，发作假阴性。另一个挑选是运用蛋白和非离子型去污剂这两种关闭液，后者可协助洗刷过程中的关闭。
蛋白关闭液则有所不一样，是持久的。它们与开放位点联系并关闭，同时安稳与微孔板联系的抗原分子。常用的蛋白关闭液包含牛血清白蛋白(BSA)、脱脂奶粉、正常血清和鱼明胶。血清组分的内涵多样性可使它有用阻拦很多不一样类型的分子相互作用。不过，它的缺点在于能与Protein A和IgG抗体相互作用。处理这个疑问的一种办法是运用鸡或鱼的正常血清。
抗体浓度须优化
咱们通常会留下来的操作过程，但是假如试剂稍有不一样，则或许需求优化抗体的量。记住，非特异的抗体联系会增加布景。为了避免这一点，切勿运用过多的一抗或二抗。
检查试剂要适量
另一点也很清楚明了：切勿运用过多的检查试剂。假如浓度过高，或许未准确稀释，则会导致高布景。也不要显色过度，如有必要，优化一下何时应参加停止液。
假如您的植物ＥＬＩＳＡ试剂盒意外地遇到了高布景，那么也无需太忧虑，顺次检查ELISA体系中的组分，并扫除或许存在的疑问。尽心优化，信任很快就会有美丽的成果。