实时荧光定觉PCR技术是指在PCR反应体系中加人荧光基团，利用荧光信号积累，实时监测整个PCR过程，后通过标准曲线对模板进行定量分析的方法。
    实时荧光定量PCR仪常用的检测模式有TaqMan/TaqMan MGB探针法和SYBR Green I荧光染料法。

    TaqMan技术要点是在普通PCR原有的一对特异性引物的基础上增加了一条特异性的荧光双标记探针.该探针同样与核酸特异性结合.且结合部位位于引物结合区域的中间.探针的5'端和3'端分别标记不同的荧光素，如5'端标记FAM荧光素，它发出的荧光能够被检测仪器接收，称为报告荧光基团;3'端一般标记TAMRA荧光素，它在近距离内能吸收5'端报告荧光基团发出的荧光信号，称为淬灭荧光墓团.当PCR反应在退火阶段时，一对引物和一条探针同时与目的基因片段结合，探针位于引物之间。此时探针5'端报告荧光基团发出的荧光信号被3'端的淬灭荧光基团吸收，仪器检测不到荧光信号。当PCR反应进行到延伸阶段时.Taq酶在引物的引导下，以四种核昔酸为底物，根据碱基配对的原则.沿着模板链合成新链。当链的延伸进行到探针结合部位时，受到探针的阻碍而无法继续.此时的Taq酶发挥它的5'-3'外切核酸酶的功能，将探针切成单核昔酸，消除阻碍，将链延伸过程进行到底，合成新链，而被水解的探针.其5'端和3'端的荧光素此时均游离于溶液中，5'端标荧光素发出的荧光信号不再被3'端的淬灭荧光基团吸收，荧光信号即被仪器接收.PCR进行一个循环，合成了多少条新链就水解了多少条探针，释放了相应数目的荧光基团，荧光信号的强度与PCR反应产物的量呈对应关系。随着PCR过程的进行.重复上述过程, PCR产物呈指数形式增长，荧光信号也相应增长(图5-3).
   与上述TaqMan探针相比，TaqMan MGB探针有两个主要不同:一是探针3'端标记了自身不发光的淬灭荧光分子，以取代常规可发光的TAMRA荧光素标记。这使荧光本底降低.荧光光分辨率得以大大改善。二是探针3'端另结合T MGB(minor groove binder)结合物，大大增加了探针的杂交稳定性，使结果、分辨率高。
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