聚丙烯酰胺凝胶RNA纯化试剂盒说明书

RNA纯化试剂盒特性与优点：
可靠--保证每一次所得产物的纯度
安全--无须接触有害的有机物
高质--高纯的RNA适合于各种应用




聚丙烯酰胺凝胶RNA纯化试剂盒说明书操作流程：

注：使用之前加入4倍体积的无水乙醇（11ul原液 + 44ul无水乙醇。

1、RNA样品用RNAase水补齐至100ul,然后加入350ul Buffer RLT，充分混匀。

2、向以上稀释的RNA液中加入250ul无水乙醇，用移液枪充分混匀,切记勿用离心机。随后立即进行步骤3。
3、将以上700ul样品液转移至吸附柱，（吸附柱放置于2ml收集管中），盖上管盖。以≥8000g转速离心15s，弃掉收集管中废液。   可选:   如果需要执行在吸附住上进行DNase消化，则需按如下步骤进行：

a.向吸附柱中加入350ul Buffer RW1，盖上管盖，以≥8000g（≥10000rpm）转速离心15s。弃掉收集管中的废液。

b.向70ul Buffer RDD中加入10ul DNase 1，混合颠倒离心管，短暂离心。

c.对准吸附柱薄膜中央加入80ul DNase 1 混合液，室温放置15min。

d.向吸附柱中加入350ul Buffer RW1，盖上管盖，以≥8000g（≥10000rpm）转速离心15s。弃掉收集管中的废液。

4、向吸附柱中加入500ul Buffer RPE,盖上管盖。以≥8000g转速离心15s，清洗滤膜。弃掉收集管中的废液。

5、重复操作4。   可选：  将吸附柱放置于新的2ml 收集管中。盖上管盖，以zui大转速离心1min。

6、将吸附柱放置于新的1.5ml收集管中，对准吸附柱薄膜中央加入30-50ul RNase-Free Water 。盖上管盖，≥8000g转速离心1min，洗脱RNA。

7、如果想获得更高的RNA浓缩液（预期的RNA产量＞30ug），重复步骤6向吸附柱中加入新的30-50ul RNase-Free Water ，或者重新利用第6步洗脱的RNA液重新加入吸附柱中洗脱。重复利用第6步中的1.5ml收集管。



聚丙烯酰胺凝胶RNA纯化试剂盒采用硅胶柱纯化方式，适合于从各种浓度各种类型的聚丙烯酰胺凝胶中回收RNA。纯化过程无需用到有害的有机物萃取及乙醇沉淀，大大减少了操作时间，提高了RNA回收效率。回收产物可用于RT-PCR、Northern杂交等实验。RNA经PAGE凝胶电泳分离后，切下含目标RNA片段的凝胶块，用两块无RNase的玻璃片压碎凝胶块(因聚丙烯酰胺胺凝胶不能溶解，这一步要尽量压碎凝胶)，用含有EDTA的缓冲液浸泡凝胶后，转移至过滤柱中过滤去除凝胶碎片，加入的结合缓冲液后，转移至HiBind®离心柱，离心结合RNA，经简单的洗涤后，用DEPC-Water洗脱RNA。



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