ELISA试剂盒操可能会出现的问题及解决办法

  >> 问题显色淡，灵敏度偏低

  可能原因

  1、试剂盒在运输途中时间太长，温度太高

  2、试剂盒未充分平衡

  3、培养箱温度不足37℃

  4、保温时间不足

  5、洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增加

  6、移液器吸液量不足，吸嘴内壁挂水太多或内壁不清洁

  7、蒸馏水水质有问题

  8、底物作用时间不足

  问题可能原因解决方法

  尽量缩短运输时间，夏季应放冰块降温

  试剂盒从2～8℃冰箱取出后打开盒盖，于室温平衡至少20分钟，确保所有试剂已平衡至室温(约25℃)。

  注意培养箱温度，放入反应板后尽量减少开启次数以免影响温度恒定，非隔水式培养箱尤其应注意

  校正定时钟准确定时

  按试剂盒说明书要求保留洗涤时间，准确记住洗涤次数

  校正移液器，吸嘴要配套，装吸嘴时要紧密，吸嘴内壁要清洁，好一次性使用

  使用新鲜合格的蒸馏水

  准确定时

  >> 背景深，全部呈有色

  可能原因

  1、洗涤不充分，洗后未拍干，样品中其它成分残留或酶标记物残留

  2、样品污染

  3、培养箱温度超过37℃或反应时间过长

  4、吸嘴重复使用，未洗净或消毒不

  5、蒸馏水被污染

  6、酶等试剂混用

  7、一次实验的标本量过多，加样时间太长，导致实际反应时间延长

  解决方法

  浓缩洗液准确配制;10倍浓缩洗涤液如有结晶则应让结晶于室温全部溶解后再量取稀释;充分洗涤，拍干。加样或加酶拍板的滤纸应弃去不用，不要反复使用，否则易造成污染

  样品应新鲜采集，或低温保存，防止污染

  调整培养箱温度，准确定时

  吸嘴尽可能一次性使用

  使用新鲜蒸馏水

  不同批号试剂勿混用

  合理安排实验，避免几块酶标板同时加样

  >> 重复性不佳

  可能原因

  1、样品数量多少不一，加样时间有长有短

  2、保温时间不一致，洗涤条件不一致，操作人员不一致

  3、加样量不一致

  解决方法

  重复某一样品时，加样时间尽可能与次接近

  重复测定标本，操作条件、人员等应尽可能与上次保持一致，以排除这些因素造成的不一致的可能性

  样品稀释前应充分混匀，尽可能使用同一移液器并装紧吸嘴

  >> 出现白板，阳性对照不显色

  可能原因

  1、显色液变质

  2、洗涤液配制有误

  3、未加酶结合物而认为已加入

  4、终止液误作洗涤液稀释或当底物液使用

  解决方法

  换新的显色液

  请按试剂盒说明书所示稀释倍数配制

  注意不要漏加

  每次加液前均应看清标签

  上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。