牛血清使用所产生的问题，如何合理热灭活?

  由于牛血清营养丰富，贮存条件特殊，因此在贮存和使用过程中容易产生以下问题：

  1、改变培养液的pH值

  牛血清的pH理论值为7.0～8.0，培养基在加入规定量的碳酸氢钠后(即达到细胞生长所需要的渗透压)，再加入10%的牛血清，一般会使培养液的pH值发生改变。因此在使用过程中应注意pH的变化，如有必要可用1mol/L NaOH或1mol/L HCl调pH到所需值。

  2、由于血清的营养成分丰富，非常适合细菌、真菌和支原体等生长，所以血清很容易受到污染。

  3、血清在贮存解冻过程中会产生沉淀，这是由于血清中含有大量脂蛋白、纤维蛋白及多肽类物质，在-15℃冷冻保存解冻后就会自然形成沉淀，随着保存时间的延长，沉淀量会增加。因此在融化血清时一般应先在4℃放置使之解冻，然后放在室温使血清完全融化，以避免沉淀的增加。添加血清时应避免把沉淀加入培养液，否则由于沉淀的存在会使得所培养的细胞产生大量黑点，或者细胞表面将会覆盖一层油状物质，影响细胞的正常生长。为减少血清的损失，可以把有沉淀的血清收集起来进行离心处理，将上清液加入培养液使用。

  如何合理热灭活

  必须要灭活，根据血清厂家多年来总结的经验，常规解冻后，40℃水浴加热20分钟即可，能够大程度地保留营养成分。

  另外，还有三个细节需要注意：

  1、将血清用三步法彻底解冻后再进行热灭活。

  2、为尽可能减轻热灭活对血清品质的影响，一次灭活的血清体积不宜过大。

  3、温度需有对照

  好准备同样的容器装相等体积的水(初始温度与血清相同温度)，灭活时将装有血清和水的容器同时放入40℃水浴，在装水的容器中放置温度计，加热过程中不时地轻轻旋转混匀血清，当温度计显示达到40℃左右，开始计时。

  胎牛血清注意事项：

  水面没过血清液面且管底不接触水浴锅底面。

  温度计需时不时晃动，且不接触管壁。

  初始温度应相同。

  两容器材质相同。

  液体体积相同。

  装水容器口用封口膜或保鲜膜封住，只露出温度计即可。

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