分光光度计测量吸光度时为什么读数会不断变化

发布时间：2020-12-21浏览次数：1573返回列表

我们在使用分光光度计测量吸光度时为什么读数会不断变化？是因为显色反应还没进行完全还是什么其他原因？其实不然，灵敏度越高的仪器，表现出的吸光值漂移越大。分光光度计的设计原理和工作原理，允许吸光值在一定范围内变化，仪器是有一定的准确度和准确度。

1、样品的稀释浓度

样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素，由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒，尤其是核酸样品。这些小颗粒的存在干扰测试效果。为使较大程度减少颗粒对测试结果的影响，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值在0.1-1.5A。在此范围内，颗粒的干扰相对较小，结果稳定。从而意味着样品的浓度不能过低，或者过高(超过光度计的测试范围)。

2、核酸本身物化性质

溶解核酸的缓冲液的pH值、离子浓度等在测试时，离子浓度太高也会导致读数漂移，因此建议使用pH值一定、离子浓度较低的缓冲液（如TE）可大大稳定读数。核酸的吸光值受pH值和缓冲液离子浓度影响。只有在一定的pH值和低离子浓度的条件下(如10mMTris-HClpH8.0)，才能得到检测结果。水的pH值不稳定，可能导致检测误差。一些缓冲液在紫外范围内存在自身吸收，为了确保准确测量，请使用与悬浮或洗脱样品时相同的缓冲液。

3、分光光度计操作因素

1)使用仪器前，使用者应该首先了解本仪器的结构和工作原理，以及各个操纵旋钮之功能。

2)仪器应放在干燥的房间内，使用时放置在坚固平稳的工作台上，室内照明不宜太强。热天时不能用电扇直接向仪器吹风，防止灯泡灯丝发亮不稳定。

3)在未按通电源之前，应该对仪器的安全性能进行检查，电源接线应牢固，通电也要良好，各个调节旋钮的起始位置应该正确，然后再按通电源开关。在仪器尚未接通电源时，电表指针必须于“0”刻线上，不是这种情况可以用电表上的校正螺丝进行调节。

4)若大幅度改变测试波长，需稍等片刻，等灯热平衡后，重新校正“0”和“100”点，然后再测量。

5)比色皿使用完毕后，立即用蒸馏水冲洗干净，并用干净柔软的纱布将水迹擦去，以防止表面光洁度被破坏，影响比色皿的透光率。

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