JN0048 2×BloTaq PCR Mas

我公司致力于为客户提供高纯度、低成本的活性重组蛋白，包括2×BloTaq PCR Mas在内的各类受体、细胞因子、生长因子、转录因子、激素、酶、毒性蛋白、病毒抗原等。...

特别提示：包括2×BloTaq PCR MasterMix(血液直接PCR)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：2×BloTaq PCR MasterMix(血液直接PCR)
产品货号：JN0048
产品规格：1ml

  Blo Taq是截短后的Taq DNA聚合酶，它缺失了5"-3"外切酶活性。Blo Taq还有其它突变，这些突变使它能够耐受全血中存在的抑制剂。此酶能够扩增人和小鼠全血样品中的DNA而无需事先提纯。Blo Taq可耐受高达体系中10%的全血。在大多数抗凝剂存在下Blo Taq依然表现良好，包括肝素、柠檬酸和EDTA。本制品是将PCR反应所需的Blo Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、MgCl2以及反应缓冲液预先配制成2倍浓度的混合物，专为常规PCR扩增反应优化。使用时只需再加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应，大大地简化了操作过程，减少了PCR操作过程的污染。2X Blo Taq PCR MasterMix提供普通型/快速上样型两种形式供您选择。经测试，染料的加入不影响PCR反应，在PCR反应完成后可直接电泳，节省时间。

产品特点：
简便：直接用血液为模板扩增目的基因，无需事先提纯（图例一）。
：有效减少了杂带产生，从而实现高特异性的PCR。
稳定：经测试，反复冻融40 次后，扩增性能仍不受影响。

产品用途：
1、直接用血液为模板进行PCR 扩增目的基因，可进行血液相关基因疾病的快速诊断；
2、基因组扩增检测。

使用建议：建议使用时添加≤10%的全血为模板，加上血液后建议用涡旋器将管中各组分轻轻混匀。

应用实例：

图例一）以人全血（EDTA 抗凝）为模板，加入不同血液量扩增
泳道1：10%全血
泳道2：5%全血
泳道3：2%全血
泳道4：0%全血
泳道M：DL2000 Marker

常用反应体系（50μl）

成分	体积
2×BloTaq PCR MasterMix	12.5μl
上游引物	0.2-1.0μM(终浓度)
下游引物	0.2-1.0μM(终浓度)
全血	0.1-2.5ul
ddH2O	至25μl
*Mg2+终浓度为3.75mM

常用PCR循环：

当扩增片段<3K：
94℃	1分钟30秒
30次循环	94℃，20秒 55℃，20秒 72℃，60秒/kb
72℃	5分钟
4℃	保温

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货号	名称	规格
YT372	Pfu DNA聚合酶(Pfu酶)(含buffer)	200U|1000U
WE0115	尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG酶)	200U|1000U
WE0143	快速实时荧光定量PCR预混体系(高含量ROX校正染料)	5ml
ALH249	热启动Taq PCR MasterMix	0.5ml|5ml
SY0024	常规Taq DNA聚合酶	1000U
SY0029	2×PCR Plus Master Mix(不含染料)	5×1ml

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名称：一管式双链cDNA合成试剂盒
货号：BTN130308
规格：10次
本产品是用于一管式双链cDNA合成的试剂盒。cDNA链合成的原理是以OligodT为通用引物的、MMLV催化的逆转录反应。其原理如下：


cDNA第二链合成的原理是用RNase H使RNA-DNA杂合链中的RNA产生切口，再用DNA Polymerase I通过切口平移(nick translation)反应进行RNA链取代合成cDNA第二链，其原理图如下：


产品特点：
1. 即开即用，含有合成两条cDNA链的所有试剂。
2.适用于含poly rA的RNA，对不含poly rA的RNA(如细菌RNA)，不能使用本试剂盒制备ds cDNA。
3.一管式进行，链cDNA合成后不需要任何处理，直接进入第二链的合成。
4. 所得双链cDNA可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR、cDNA文库构建、抑制性差减杂交等。
5. 本试剂盒足够10次80μL体系的双链cDNA合成反应。
6. 如果需要合成全长cDNA，zuì好选用SMART全长cDNA双链合成试剂盒。

试剂盒组成：

成分	规格
Oligo dT引物	10μl
cDNA链合成缓冲液	40μl
MMLV 逆转录酶(200U/μL)	10μl
5×cDNA 第二链合成缓冲液	160μl
20×cDNA 第二链合成酶混合液	40μl
T4 DNA聚合酶	20μl
0.2 M EDTA溶液	40μl
超纯水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一：mRNA的制备
本试剂盒不提供mRNA提取试剂，用户需自备相关试剂。

二：双链cDNA的合成
1.在一个干净的塑料离心管中，按下表设置cDNA合成反应：

成分	用量
自备mRNA样品	4μl(0.5-2μg)
Oligo dT引物	1μL
70℃ 2分钟后室温放置2分钟，短暂离心
cDNA 链合成缓冲液	4μL
MMLV 逆转录酶	1μL
轻柔吹打混匀后42℃保温90分钟合成链cDNA
超纯水	48μL
cDNA 第二链合成缓冲液	16μL
cDNA 第二链合成酶混合液	4μL
轻柔吹打混匀后，短暂离心，16℃保温2小时
自备的T4 DNA聚合酶	2μL
轻柔吹打混匀后，16℃继续保温30分钟
0.2M EDTA溶液	4μL

注：如果不需要将双链cDNA平末端化，则可以跳过T4 DNA聚合酶处理步骤。
2.电泳5μL检测cDNA质量。如果cDNA在0.5-10Kb的范围内呈模糊一片，则cDNA合格。如果没看见cDNA或有其他异常，需查找原因后再继续。
3. 所得cDNA可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR、cDNA 文库构建、抑制性差减杂交等实验。

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