ZN1528 细胞凋亡检测试剂盒IV

北京百奥莱博供应的细胞凋亡检测试剂盒IV用于科学研究，本品质量稳定，价位合理，需要细胞凋亡检测试剂盒IV等细胞凋亡与增殖产品的客户，欢迎您的随时垂询。...

特别提示：包括细胞凋亡检测试剂盒IV(FITC+POD)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：细胞凋亡检测试剂盒IV(FITC+POD)
产品货号：ZN1528
产品规格：20T

保存条件：-20℃冰冻保存。
保存期：一年
工作原理：
在机体内部随时都在发生着细胞的死亡。传统上用显微镜来观察细胞的死亡，其特征为核染色质的浓缩及碎片的形成。但是这种现象出现的很晚，时间也很短暂。凋亡的特征是内源性核酸内切酶被激活，细胞自身的染色质或DNA 被切割，出现单链或双链缺口，并产生与 DNA 断点数目相同的3’-OH 末端。末端脱氧核糖核酸转移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase)可以将dì高辛标记的dUTP(DIG-dUTP)标记至 3’-OH 末端，DIG-dUTP 结合在 DNA 断点部位，可以通过生物标记的抗dì高辛抗体(Anti-DIG-Biotin)反应后，再结合荧光素 FITC或者过氧化物酶 POD 标记的链酶亲和素(SABC-FITC/SABC-POD)。FITC 在 490-495nm 激化，在 520-530nm 发射荧光，在荧光显微镜下呈明亮黄绿色。POD的在加入显色底物 DAB 显色后，凋亡的细胞核呈棕黄色。用户根据实验需要，在不同切片上用两套不同显示系统观察。
试剂盒内容：
1．标记缓冲液(Labeling Buffer)1ml
2．末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT,×20)20μl
3．DIG-dUTP(×20)20μl
4．封闭液(Blocking Reagent)4ml
5．生物素化抗dì高辛抗体(× 100)20μl
6．SABC-FITC(× 100)20μl
7．SABC-POD(× 100)20μl
8．Proteinase K(×200)50μl
9．抗体稀释液 4ml
10．未染色阳性对照片 2 张。
用户自备试剂：
1．多聚赖氨酸或APES。
2．0.01M TBS,PH7.5(配法:1L 双蒸馏水中加入8.5克氯化钠,1.2克 Tris和0.45—0.5ml纯乙酸。)
3．水溶性封片剂。
操作步骤：
1．样品处理
(1)玻片预先用多聚赖氨酸或APES 进行处理。
(2)细胞涂片和冰冻切片：zuì重要的是及时固定。用 4%多聚甲醛/0.01M PBS(PH7.0---7.6)室温下固定 30—60分钟。0.01M PBS洗2分钟×2次。蒸馏水洗涤 2分钟×2次。
(3)组织：有条件时应及时固定。常规 4%多聚甲醛/0.01M PBS(PH7.0---7.6)或10%中性缓冲福尔马林固定4小时以上，石蜡包埋。切片常规脱蜡入水(脱蜡务必干净)。
2．标本片加 0.01M TBS 1:200 新鲜稀释 Proteinase K 37℃消化 1—15分钟,0.01M TBS洗2分钟×3次。(细胞涂片和冰冻切片一般不消化或消化 10—60 秒钟。新鲜石蜡切片消化 5-10分钟。陈旧石蜡切片消化 10-15分钟)。
3．标本片加标记缓冲液(Labeling Buffer)20μl/片,以保持切片湿润。按每张切片取 TdT和DIG-d-UTP 各1μl，加入18μl标记缓冲液中，混匀。甩去切片上多余液体后加标记液，20μl/片。置样品于湿盒中，37℃标记2小时。
4．0.01M TBS洗2分钟×3次。
5．加封闭液 50μl/片，室温30分钟，甩掉封闭液，不洗。
6．用抗体稀释液 1：100 稀释生物素化抗dì高辛抗体：(取 1ml 抗体稀释液加生物素化抗dì高辛抗体10μl)，混匀后 50μl/片加至标本片上。置样品于湿盒中，37℃反应30分钟。0.01M TBS洗2分钟×3次。
7．用抗体稀释液 1：100 稀释 SABC-FITC/(SABC-POD)：取 1ml 抗体稀释液加 SABC-FITC/(SABC-POD 10μl，混匀后 50μl/片加至切片。37℃反应30分钟。0.01M TBS洗5分钟×4次。
8．加 SABC-FITC的在荧光显微镜下用蓝色光激发观察。
9．加 SABC-POD的，可选用 DAB 显色：取 1ml 蒸馏水，分别加入 DAB 试剂盒中 A，B，C 试剂各一滴，混匀后加至标本片上，显色 10-30分钟左右。水洗。
10．苏木素轻度复染。0.01M TBS洗，蒸馏水洗。水溶性封片剂封片。
结果判定：
荧光显微镜下：细胞核中有黄绿色颗粒者为阳性细胞，即凋亡的细胞。
普通显微镜下：细胞核中有棕黄色颗粒者为阳性细胞，即凋亡的细胞。
注意事项：
1.试剂盒严格-20℃存放。
2.初用时如试管底部无可见的试剂，在离心机离心 5分钟，使试剂沉至管底。
3.检测过程中切勿使样品干涸。

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SY0495 DAPI双链DNA染料 10mg

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名称：细胞凋亡DNA断裂片段提取试剂盒
货号：YT120
规格：50次
本试剂盒是针对细胞凋亡过程中产生的核小体间DNA链断裂而设计的。可以非常有效地抽提zuì小片段为180-200bp的DNA ladder，同时又可以抽提到50kb以上的基因组DNA。DNA ladder也称DNA fragmentation，是细胞凋亡的一个重要指标。通常观察到DNA ladder，就可以判定细胞发生了凋亡。本试剂盒足够抽提50个细胞或组织样品。

试剂盒组份：
样品裂解液———30ml
蛋白酶K————130μl
10M 醋酸铵——6ml
TE——————6ml

注意事项：需自备Tris平衡苯酚、氯fǎng和无水乙醇。

储存条件：-20℃，有效期一年。

名称：细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(WST-1法)
货号：YT126
规格：100次|500次
本试剂盒是一种广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。WST-1是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan(参考下图)。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。



WST-1是MTT的一种升级替代产品，和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。先，MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液来溶解；而WST-1和XTT、MTS产生的formazan都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。其次，WST-1产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。再次，WST-1比XTT和MTS更加稳定，使实验结果更加稳定。另外，WST-1和MTT、XTT等相比，线性范围更宽，灵敏度更高(参考下图)。



本试剂盒可以用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测，也可以用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测，或一些药物诱导的细胞生长抑制检测等。

本试剂盒检测非常便捷。无须使用同位素，所有的检测步骤仅在同一块96孔板内完成。不必洗涤细胞，不必收集细胞，也不必采用额外步骤去溶解formazan。可以用于大批量样品的检测。

酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。WST-1对细胞无明显毒性。加入WST-1显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读板，使检测时间更加灵活，便于找到zuì佳测定时间。

注意事项：
由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发的问题。一方面，由于96孔板周围一圈zuì容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加PBS，水或培养液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。

储存条件：-20℃，有效期一年。

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