MQ0003 0F`化学感受态细胞

北京百奥莱博供应的0F`化学感受态细胞用于科学研究，0F`化学感受态细胞是我司众多优质克隆与表达之一，质量堪比同类进口产品，价格非常优惠，目前正热烈促销中，恭候您的咨询订购。...

特别提示：包括0F`化学感受态细胞在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：0F`化学感受态细胞
英文名称：0F′Chemically Competent Cell
产品货号：MQ0003
产品规格：10×100μl/50×100μl

0F`菌株来源于0菌株。
将F`{lacIq Tn10(TetR)}因子转入0菌株，即为0F`。
该F`因子携带lacIq 抑制子，可抑制trc，tac，lac等启动子下游基因的表达，从而可以用于一些表达毒性蛋白质粒的扩繁。
recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。
0F可用于构建克隆，蓝白斑筛选(如用于蓝白斑筛选，需在培养基中加入IPTG诱导β-半乳糖苷酶基因的表达)实验，具有四环素抗性。
0F`感受态细胞经特殊工艺制作，经pUC19质粒检测转化效率>107cfu/μg。
保存条件：-80℃
基因型：
F´{lacIq Tn10(TetR)} mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC)Φ80lacZ∆M15 ∆lacX74 recA1araD139 ∆(ara-leu)7697 galU galK rpsL endA1 nupG
操作说明：
1.0F`感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀，冰中静置25分钟。
2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱 12-16h，时间过长会产生假阳性小菌落。
注意事项：
1.感受态细胞zuì好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2.混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3.转化高浓度的质粒或率的连接产物可相应减少zuì终用于涂板的菌量。

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货号	名称	规格
BTN90407B	pression/BTN90407B.html" target="_blank">λDNA(不含N6-甲基腺嘌呤)	5μg
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BTN60207	pression/BTN60207.html" target="_blank">氯霉素溶液	10mL
YT001	pression/YT001.html" target="_blank">质粒小量抽提试剂盒	50次|200次
YT443	pression/YT443.html" target="_blank">pGL6-TA报告基因质粒	1μg

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名称：DNA磷酸化试剂盒
货号：BTN130813
规格：20次
人工合成的PCR引物、linker和adaptor的5′端一般都是-OH基团而不是-PO4基团(除非额外付费要求在人工合成时加上-PO4基团)，而任何DNA连接酶都不能将一个DNA分子5′端的-OH基团和另一个DNA分子3′端的-OH基团进行连接，因此通过人工合成的DNA片段和天然DNA 之间的连接效率一般都比天然DNA 彼此的连接效率低(天然DNA 4个端口均可连接，人工合成的DNA跟天然DNA 有2个端口可以连接，人工合成的DNA之间没有任何端口可以连接)，尤其是在平末端连接时。本公司开发的DNA 磷酸化产品能将DNA分子5′端的-OH基团磷酸化。

产品特点：
1.可以快速把DNA的5′端的-OH基团变成-PO4基团，使人工合成的DNA(包括PCR产物)跟天然DNA一样有高的连接效率。
2. 既可以对单链DNA进行磷酸化处理，也可以对双链DNA片段同时磷酸化处理。
3.处理后的DNA可以直接用于连接反应、克隆等，不需要纯化。
4. 本产品足够20次DNA的磷酸化实验。

成分	规格
10×TPK缓冲液	50μl
ATP溶液(10mM)	100μl
T4 多核苷酸激酶(10U/μL)	20μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期为6个月。

使用方法：

一：双链DNA片段(5′端为-OH基团的)的磷酸化
注意：如果是PCR产物，一定要先胶回收，不能使用没经过纯化的PCR反应液，因为其中的残留PCR引物会耗掉大量的激酶，降低PCR产物的磷酸化效率。
1、在微量离心管中配制下列反应液(20μL)：

成分	用量
PCR胶回收片段	2μL(不超过10pmol)
10×TPK缓冲液	2μl
ATP溶液(10mM)	5μl
T4 多核苷酸激酶(10U/μL)	1μl
超纯水到	20μl

2、37℃反应30分钟。
3、70℃热处理5分钟，灭活酶。
4、可直接用于后续克隆(加入量不要超过总体积的1/5)。

二：单链DNA片段的磷酸化
注：单链DNA 包括局部双链的DNA。引物，linker，adaptor，Oligo探针等均按此操作处理。
5、在微量离心管中配制下列反应液(20μL)：

成分	用量
单链DNA片段	5-10 pmol
10×TPK缓冲液	2μl
ATP溶液(10mM)	1μl
T4 多核苷酸激酶(10U/μL)	1μl
超纯水到	20μl

6、37℃反应30分钟。
7、70℃热处理5分钟，灭活激酶。
8、可直接用于后续克隆(加入量不要超过总体积的1/5)。如果使用浓度高，则可能需要乙醇沉淀法浓缩DNA。如果单链DNA的浓度低于5pmol，还需要在乙醇沉淀时加入核酸助沉剂。沉淀得到的DNA可溶解在适量的水中。

附：乙醇沉淀浓度DNA(本试剂盒不提供相关试剂，下列操作仅供参考：
1、在DNA溶液中加入0.1倍体积的3 M 乙酸钠溶液(pH5.2)。
2、再加入2.5倍体积的无水乙醇和4uL 核酸助沉剂。
3、混匀后12000g 4℃离心10分钟，小心弃上清。
4、加入1mL 70%乙醇，短暂离心3分钟后小心弃上清。
5、短暂离心5秒，吸弃残留液体(约30-50μL)。
6、室温放置2分钟干燥后加入适量的超纯水溶解DNA，立即使用或放-20℃长期保存。

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