YT398 cDNA第二链合成试剂盒

cDNA第二链合成试剂盒的品牌是百奥莱博，是优质的核酸扩增(PCR)产品，本制品用于科学研究，本品质量稳定，价位合理，需要cDNA第二链合成试剂盒等核酸扩增(PCR)产品的客户，欢迎您的随时垂询。...

特别提示：包括cDNA第二链合成试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：cDNA第二链合成试剂盒
英文名称：Second Strand cDNA Synthesis Kit
产品货号：YT398
产品规格：10次

本试剂盒是一种在合成了cDNA链的基础上去除RNA-DNA杂合链中的RNA链并合成cDNA第二链，zuì终形成双链cDNA的试剂盒。本试剂盒包含了进行cDNA第二链合成所需的各种试剂。

本试剂盒采用RNase H使RNA-DNA杂合链中的RNA产生切口，此时DNA Polymerase I可以通过切口平移(nick translation)反应催化形成cDNA第二链。

使用本试剂盒合成的双链cDNA，可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR、cDNA文库的构建等。

本试剂盒用于体积为20微升的cDNA链合成反应的后续反应时，足够进行20个cDNA第二链样品的合成。

产品组份：
RNase H(1U/μl)————————10μl
DNA Polymerase I(10U/μl)———30μl
Reaction Buffer(10X)——————100μl

储存条件：-20℃。

注意事项：
1）进行第二链合成时，dNTP比较适当的zuì终浓度约为0.2mM。如果zuì终浓度过低，在反应体系中需要适当补充dNTP。
2）如果希望获得平末端的双链cDNA，可以用T4 DNA Polymerase(YT403)或DNA末端平滑试剂盒(YT404)处理。
3）酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。

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货号	名称	规格
WE0109	Babuddy超保真DNA聚合酶	100U
WE0141	快速实时荧光定量PCR预混体系	5ml
WE0153	快速实时荧光定量PCR的预混体系(荧光探针)(高含量ROX校正染料)	5ml
WE0158	miRNA荧光定量检测试剂盒	125次
RFT106	随机六聚体引物	100μl
SY0038	热启动高保真酶	100U

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名称：dNTP和引物清除剂
货号：BTN131141
规格：100次
本产品是基于酶学方法的一步法清除dNTP和引物的试剂，用于在PCR结束后去除残留的dNTP和引物，使PCR产物可以不经过任何形式的回收而直接用于后续的测序等反应。



储存条件：低温运输和-20℃保存、有效期一年。

名称：PCR Mix染料
货号：BTN131212
规格：10mL
本产品可加入到PCR反应液中，使PCR产物可直接上样电泳，其分子量相当于50bp大小的DNA片段，不干扰观察。
注：本产品不是PCR荧光染料，是一类可见光染料(类似电泳用的溴酚蓝，二甲苯蓝等指示剂)

储存条件：低温运输和-20℃保存、有效期一年。

名称：PCR级高GC的DNA清除剂
货号：BTN61203
规格：1.5mL
本产品是我司开发的专门用于富含GC的DNA模板扩增的试剂。

产品特点：
1.，使用效果普遍好于常规的添加DMSO和甜菜碱的方法。
2.可以处理GC含量高达80%的DNA模板。
3. 操作简单，将本产品用于溶解DNA沉淀即可使用。

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

使用方法：
将乙醇沉淀的高GC DNA直接溶解在适量的本产品中，充分吹打均匀，然后直接将DNA加入PCR反应体系中进行PCR反应。加入的DNA溶液zuì好不要超过PCR终体积的1/10。剩余的DNA可以长期保存。

名称：miRNA cDNA链合成试剂盒
货号：BTN130911
规格：25次
本试剂盒采用在miRNA 3′末端加多聚A 尾的方法来使miRNA 具有Poly(A)尾，之后再使用Oligo(dT)-Tag引物进行逆转录反应，zuì终合成miRNA 对应的链cDNA。其反应流程如下：


产品特点：
1. 两步式操作，行Poly(A)加尾，再进行逆转录反应。
2. 只需要1μg的total RNA。
3. 所得cDNA可用于检测多种miRNA，不仅减少了误差、节约了样品，同时还实现了检测的高通量。
4.与miRNA荧光定量PCR 检测试剂盒兼容。
5.特异性好，独特的miRNA引物及反应体系避免了Pre-miRNA的非特异扩增。

试剂盒组成：

成分	规格
E.coli Poly(A)聚合酶(5U/μL)	10μl
10×Poly(A)聚合酶反应液	50μl
ATP溶液，1mM	50μl
Oligo(dT)-Tag引物(0.5ug/μL)	25μl
MMLV 逆转录(含RI)	50μl
4×RT Buffer(含dNTP)	125μl
RNase-free 水	1ml

储存条件：低温运输，-20℃保存。

使用方法：

一、对miRNA 3′末端进行加Poly(A)处理
1.在冰上预冷RNase-Free的反应管内加入以下试剂至总体积20μL。注意需要zuì后加入E.coli Poly(A)聚合酶。

试剂组份	体积
自备的Total RNA(见注)	1μg
10× Poly(A)聚合酶反应液	2μl
ATP溶液，1mM	2μl
RNase-Free水	补水至20μL
E.coli Poly(A)聚合酶(5U/μL)	0.4μL(2U)

注：在反应中使用的Total RNA必须含有miRNA。也可以直接使用miRNA(建议加入量为2–5μL，需根据目的miRNA的丰度决定)。
2. 移液器轻轻混匀上述配制的反应液，短暂离心后在37℃反应60 min。所得的反应液可以直接进行下游实验(注意：只能把2μL 直接用于后续的RT反应，多于2μL 则需要先乙醇-乙酸钠沉淀，再将加尾后的miRNA 溶于水，然后再取所需量用于RT。如果不经过沉淀，带入的残留的poly(A)聚合酶反应液将会干扰RT反应)，也可以放置-20℃短暂保存。如需长期保存建议存放于-80℃。

二、对带Poly(A)尾巴的miRNA进行逆转录反应
3. 按照下表设置20μL体系的RT反应：

成分	体积
Poly(A)反应产物(来于上步)	2μl
RNase-Free水	10μl
Oligo(dT)-Tag引物	1μl
4×RT Buffer(含dNTP)	5μl
MMLV 逆转录酶(含RI)	2μl

4. 移液器轻轻混匀上述配制的反应液，短暂离心后在42℃反应60 min。
5. 70℃保温10 min 终止反应。
6. 合成的cDNA反应液可放置于-20℃保存；也可以暂时冰上放置，立即用于后续的荧光PCR 定量检测，不需要纯化。

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