JN0113 单细胞全基因组PCR扩增试剂盒

我公司致力于为客户提供高纯度、低成本的活性重组蛋白，包括单细胞全基因组PCR扩增试剂盒在内的各类受体、细胞因子、生长因子、转录因子、激素、酶、毒性蛋白、病毒抗原等。...

特别提示：包括单细胞全基因组PCR扩增试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：单细胞全基因组PCR扩增试剂盒
产品货号：JN0113
产品规格：10次

  单细胞全基因组扩增试剂盒基于多重链置换扩增的Phi29 DNA聚合酶等温扩增体系，Phi29 DNA聚合酶是从Bacillus subtilis噬菌体Phi29中克隆出的嗜温DNA聚合酶，利用基因重组技术，在大肠杆菌中进行表达后经多次纯化分离而得。Phi29 DNA聚合酶具有很强的链置换活性，可实现对DNA复杂结构的解链与复制。同时具有的DNA合成能力，可连续合成多达70kb的DNA片段。Phi29 DNA聚合酶具有很强的3’→5’外切酶活性，保真度高于大多数高保真酶，因此Phi29 DNA聚合酶特别适合用于全基因组扩增。
  本试剂盒可以实现单个细胞或者少量样本的全基因组无差别扩增，一个反应可以达到40ug的全基因组DNA。低质量样品会影响DNA的zuì终产量，如果以DNA样品为模板，需避免使用降解的DNA作为起始模板。

产品组成：

组份	体积
Cell Lysis Buffer	1ml
Neutralization Buffer	1ml
Reaction Buffer	1ml
GenoPhi29 Buffer	1ml
GenoPhi29 Enzyme(10U/ul)	50ul
ddH2O	1ml

试剂盒特点：
高覆盖度：经过扩增后可达到95%以上覆盖度。
高均一度：无偏好扩增，可实现全基因组的均一扩增。
高保真：具有很强的校正功能，保真度高。
灵敏：可实现从单个细胞样本的全基因组扩增

实验方案：
方案适用于以1-1000个新鲜配制的细胞样品作为模板，以保证起始基因组的完整性。
1、将细胞用PBS洗涤三次。
2、取一倍体积的细胞，加入一倍体积的Cell Lysis Buffer，轻轻混匀（勿涡旋混匀）后置于冰上放置10min。
3、加入一倍体积的Neutralization Buffer，轻轻混匀，勿涡旋混匀。
4、从上述混合液中取3μL样品，加入7μL无菌水，10μL Reaction Buffer。将20uL上述处理后的样品加入到25uL GenoPhi29 Buffer中。
注意：如果不进行后续反应，需冰上放置。
5、加入5μL GenoPhi29 Enzyme，30℃反应3h。
注意：65℃，10min失活Phi29 DNA聚合酶。
6、扩增产物是高浓度基因组DNA，需要将扩增产物用无菌水或者TE缓冲液进行稀释后进行下游实验。

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货号	名称	规格
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名称：大肠杆菌XL1-Blue化学感受态细胞
货号：BTN90504
规格：0.1mL*10
 本产品是采用大肠杆菌XL1-Blue菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。该菌株适用于的DNA 克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定复制；适合非甲基化DNA的转化。使用pUC19质粒检测，转化效率可达107。本感受态细胞具有四环素抗性。

菌株的基因型：recA1 endA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 supE44 relA1 lac[F- proAB laclqZΔ M15 Tn10(Tetr)]。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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