HR0421 Caspase 1活性检测试剂盒

北京百奥莱博供应的Caspase 1活性检测试剂盒用于生化实验研究等领域，Caspase 1活性检测试剂盒是我司众多优质细胞凋亡与增殖之一，质量堪比同类进口产品，价格非常优惠，目前正热烈促销中，恭候您的咨询订购。...

特别提示：包括Caspase 1活性检测试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Caspase 1活性检测试剂盒
产品货号：HR0421
产品规格：20T|50T|100T

Caspase 1活性检测试剂盒(Caspase 1 Activity Assay Kit)是采用分光光度法检测细胞或组织裂解液中Caspase 1酶活性或纯化的Caspase 1酶活性的试剂盒。
Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)是一个在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 1 也称interkeukin 1b conberting enzyme(ICE)，有时被写作caspase-1或caspase 1，是caspase 家族中可以剪切IL-1b前体蛋白或IL-18 前体产生相应成熟的细胞因子的caspase。Caspase11可以剪切45kD的caspase 1前体蛋白，产生20kD和10kD的片断，这两个片断可以形成异源二聚体(heterodimer)，并进一步由两个异源二聚体形成四聚体。Caspase 1可以通过剪切其凋亡Bcl-XL 来调节细胞凋亡，并通过其对一些细胞因子前体的剪切来调控相关免疫反应。
本Caspase 1活性检测试剂盒是基于caspase1可以催化Caspase1 底物产生黄色的pNA，pNA在405nm附近有强吸收，从而可以通过测定吸光度来检测caspase 1的活性。
本试剂盒用酶标仪检测或容量不超过100μl的分光光度检测杯检测，可用于培养细胞或新鲜组织样本的caspase-1检测。

储存条件：裂解缓冲液和检测液2-8℃保存；其他-20℃避光保存。
有效期：一年。

注意事项：
● 须自备可以测定A405或A400的酶标仪或容量不超过100μl的分光光度检测杯及相应分光光度计。优先考虑测定A405。
● 37℃下反应如果颜色变化不明显，可以适当延长反应时间。
● 样品适合采用Bradford 法进行蛋白浓度测定。
● 如果样品中蛋白含量低，裂解样品时需设法使样品中的蛋白浓度大于2mg/ml。
● 如果样品中激活的caspase 水平很低，适当调节诱导细胞凋亡的时间，找一个caspase激活比较强的时间点进行检测。
● Caspase-1底物避光保存，使用过程中尽量避光。
● Caspase-1底物溶液冻存后可能产生沉淀，使用前请混匀。

使用方法：
一、裂解缓冲液和检测缓冲液配制
根据待测样品数准备裂解缓冲液和检测缓冲液，每1ml缓冲液中加入10μl DTT。
二、样品处理
A、细胞样品
1．收集2-5×106个细胞，在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
2．用冷PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3．在细胞中加入100μl冷的裂解缓冲液，高速涡旋振荡15秒。
4．置冰上15分钟，每隔5分钟高速涡旋振荡15秒。
5．在4℃，500×g条件下离心5分钟。
6．快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
B、组织样品
1．取适量组织样本剪碎，按照50mg/100μl冷的裂解缓冲液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体(或用液氮研磨)，冰上静置15分钟，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。

1．在4℃，500×g条件下离心5分钟。
2．快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
三、对上述处理过的上清用Bradford 法进行蛋白定量。
四、Caspase 1活性检测
1．取10μl 大约含20-50μg蛋白的裂解上清，加入90μl检测缓冲液。
2．再加入10μl caspase-1 底物(使用前请混匀)，在37℃下避光反应1-2小时，有黄色颜色产生即可进行检测，如果颜色变化不明显，时间可以延长，甚至孵育过夜。部分样品中激活的caspase-1水平较低，颜色变化不明显，直接上机检测，与对照组样品产品变化即可。
3．测定A405nm或A400nm。
4．根据凋亡诱导的细胞的吸光值与空白对照细胞的吸光值的比值计算相对的Caspase 1活性程度。
常见问题分析：
比色法caspase-1活性检测方法常见的问题主要为测得的OD值偏低，颜色变化不明显，无法显示与对照组细胞的差异，其可能的原因主要集中在以下几个方面：
1．样品上样量不够：本方法检测需要的细胞数量须在3×106以上，或者新鲜组织50mg以上，每次反应的蛋白量需要在100μg以上。如果量不够，请增加细胞或组织的量。
2．样本不新鲜：使用新鲜的细胞或组织样本。
3．样品裂解不够充分：细胞或组织需要进行充分裂解，zuì好可以加入适当的蛋白酶抑制剂混合物裂解，裂解后应无明显大量的沉淀，以保证有效获得蛋白。
4．样品中激活的caspase-1 水平偏低：先确认模型的凋亡现象是否明显，以及根据文献和其他验证方法确认该凋亡是否激活caspase-1。
5．检测时间点的选择是否合适：不论哪种通路的凋亡，需要在caspase-1被有效激活并达到相应活化程度后的一定时间范围内检测，过早或过晚均不合适。
6．不适合本方法检测：某些凋亡诱导剂诱导的凋亡可能是非依赖于caspase-1活化的机制，此种情况时利用本试剂盒检测caspase-1 无明显变化，需要考虑凋亡机制的其他通路。

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名称：细胞凋亡DNA断裂片段提取试剂盒
货号：YT120
规格：50次
本试剂盒是针对细胞凋亡过程中产生的核小体间DNA链断裂而设计的。可以非常有效地抽提zuì小片段为180-200bp的DNA ladder，同时又可以抽提到50kb以上的基因组DNA。DNA ladder也称DNA fragmentation，是细胞凋亡的一个重要指标。通常观察到DNA ladder，就可以判定细胞发生了凋亡。本试剂盒足够抽提50个细胞或组织样品。

试剂盒组份：
样品裂解液———30ml
蛋白酶K————130μl
10M 醋酸铵——6ml
TE——————6ml

注意事项：需自备Tris平衡苯酚、lǜ仿和无水乙醇。

储存条件：-20℃，有效期一年。

名称：线粒体膜电位检测试剂盒
货号：YT148
规格：>100次
本试剂盒是一种以JC-1为荧光探针，快速灵敏地检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位变化的试剂盒，可以用于早期的细胞凋亡检测。

JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential)△Ψm的理想荧光探针。可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。在线粒体膜电位较高时，JC-1聚集在线粒体的基质(matrix)中，形成聚合物(J-aggregates)，可以产生红色荧光；在线粒体膜电位较低时，JC-1不能聚集在线粒体的基质中，此时JC-1为单体(monomer)，可以产生绿色荧光。这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去化的比例。

线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。通过JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降，同时也可以用JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的一个检测指标。

JC-1单体的zuì大激发波长为514nm，zuì大发射波长为529nm；JC-1聚合物(J-aggregates)的zuì大激发波长为585nm，zuì大发射波长为590nm。实际观察时，使用常规的观察红色荧光和绿色荧光的设置即可。

本试剂盒提供了CCCP作为诱导线粒体膜电位下降的阳性对照。对于六孔板中的样品，本试剂盒共可以检测100个样品；对于12孔中的样品，本试剂盒共可以检测200个样品。

试剂盒组分：
JC-1(200X)——————100μl/管，共5管
超纯水————————90ml
JC-1染色缓冲液(5X)——80ml
CCCP(10mM)——————20μl

注意事项：
1. JC-1(200X)在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。
2. 必须先把JC-1(200X)用试剂盒提供的超纯水充分溶解混匀后，才可以加入JC-1染色缓冲液(5X)。不可先配制JC-1染色缓冲液(1X)再加入JC-1(200X)，这样JC-1会很难充分溶解，会严重影响后续的检测。
3. 装载完JC-1后用JC-1染色缓冲液(1X)洗涤时，使JC-1染色缓冲液(1X)保持4℃左右，此时的洗涤效果较好。
4. JC-1探针装载完并洗涤后尽量在30分钟内完成后续检测。在检测前需冰浴保存。
5. 请勿把JC-1染色缓冲液(5X)全部配制成JC-1染色缓冲液(1X)，本试剂盒使用过程中需直接使用JC-1染色缓冲液(5X)。
6. 如果发现JC-1染色缓冲液(5X)中有沉淀，必须全部溶解后才能使用，为促进溶解可以在37℃加热。
7. CCCP为线粒体电子传递链抑制剂，有毒，请注意小心防护。

储存条件：-20℃。

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