BTN140383 农杆菌EHA105化学感受态细胞

北京百奥莱博供应的农杆菌EHA105化学感受态细胞用于科研试验，农杆菌EHA105化学感受态细胞是我司众多优质克隆与表达之一，质量堪比同类进口产品，价格非常优惠，目前正热烈促销中，恭候您的咨询订购。...

特别提示：包括农杆菌EHA105化学感受态细胞在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：农杆菌EHA105化学感受态细胞
英文名称：E.coli EHA105 Chemical Competent Cell
产品货号：BTN140383
产品规格：10×100μL

 本产品为EHA105农杆菌化学感受态细胞，为C58型背景，核基因中含有筛选标签-利福平抗性基因rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒pEHA105(pTiBo542DT-DNA)，此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA 插入植物基因组必需的元件，pEHA105(pTiBo542DTDNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。本产品适用于水稻、烟草等植物的转基因操作，经pCAMBIA2301质粒检测转化效率高达103cfu/μg。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期一年。

自备试剂：质粒DNA、液氮等

使用方法：

转化前准备
1. 冰水浴和37℃水浴。
2.液氮或干冰/乙醇混合物。
3. 将抗性平板在28℃培养箱中平衡至少15分钟。
转化方法
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态细胞于冰水浴中融化。
2. 无菌条件下，向刚刚融化的感受态细胞悬液中加入需要转化的质粒，每100μL感受态细胞加1ug(体积不大于10μl)质粒DNA，轻柔混匀。冰水浴中静置5分钟。
3. 将离心管置于液氮中速冻5分钟(注：也可以用干冰和无水乙醇混合物替代液氮)。
4. 迅速将离心管置于37℃水浴静置中5分钟，不要晃动水面。然后快速转至冰水浴中静置5分钟。
5. 加入800μl 无抗生素的2×YT或LB液体培养基，28-30℃振荡培养2～3小时。使菌体复苏，表达抗性。
6. 5000rpm离心1分钟收菌，保留100μl左右上清，轻轻吹打重悬菌体，均匀涂布到含有相应抗生素的LB 固体培养基平板上，待平板中的液体完全吸收后，倒置平板，28-30℃培养48-72小时。
 注：当平板只含有50μg/mL kan时，28℃培养48 h 即可；平板中同时加入50μg/mL kan、20μg/mL rif时，需28℃培养60 h；如果使用的平板含有50μg/mL rif 则需要28℃培养72-90h。

注意事项：
1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
2. 混入质粒时应轻柔操作。转化高浓度的质粒可相应减少zuì终用于涂板的菌量。
3. 平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应减少质粒用量。
4. 利福平浓度不应高于25μg/mL，过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。本公司感受态计算转化效率时所用平板只含有50μg/mL kan，若所用平板含有20μg/mL rif 则转化效率降低到1/2。
5.培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入Ti质粒筛选抗生素可防止Ti质粒丢失，但Ti质粒筛选抗生素不利于农杆菌的转基因操作，所以一般培养农杆菌时不考虑这些抗生素，Ti质粒丢失的概率低(可以忽略)。

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名称：单细胞裂解液(DNA提取)
货号：BTN130803
规格：1mL
本产品为单细胞DNA提取专用裂解液，本裂解液经多次优化，含有多种去污剂、变性剂和盐，可有效抑制核酸酶在裂解过程中对核酸的破坏，维持核酸结构的稳定。纯化所得DNA可用于全基因组扩增(WGA)等实验。本产品足够使用200次以上。

储存条件：低温运输，4℃保存，有效期两年。

名称：单细胞悬浮液
货号：BTN130805
规格：1mL
本产品是单细胞悬浮溶液，本产品与后续各种单细胞分析实验、单细胞扩增实验兼容。

储存条件：低温运输，4℃保存，有效期一年。

名称：大肠杆菌BL21 Star(DE3)化学感受态细胞
货号：BTN150801
规格：10*100μL
 BL21 Star(DE3)感受态细胞来源于BL21(DE3)菌株，由特殊工艺制作，使用pUC19质粒检测本产品，转化效率可达10cfu/μg。
 BL21 Star(DE3)菌株的特点是含有rne131基因突变体。rne131突变基因能够增强菌株细胞内mRNA的稳定性，从而有效提高蛋白表达能力。本产品主要适用于T7启动子表达载体(如pET 系列)的高水平蛋白表达。
 菌株基因型为：F-ompT hsdSB(rB-mB-)gal dcm rne131(DE3)。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、LB培养基等。

使用方法：
1.从-80℃冰箱中取出感受态细胞，置于冰上解冻。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，可以根据实际情况分装使用。以下实验以100μL感受态细胞为例。
2. 取 100μL冰上融化的BL21 Star(DE3)感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。
3. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
4. 向离心管中加入700μL不含抗生素的无菌培养基(LB)，混匀后37℃，200rpm 复苏60分钟。
5. 取100μL左右菌液涂布于含相应抗生素的LB培养基上。如果转化高浓度的质粒，可以减少涂布的量。
6. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

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