BTN100203 通用型LAMP试剂盒

通用型LAMP试剂盒由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品仅用于生物化学研究方面，我公司的通用型LAMP试剂盒品质上佳，经过多年的开发生产，已然非常成熟，欢迎广大新老客户订购。...

特别提示：包括通用型LAMP试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：通用型LAMP试剂盒
英文名称：Universal Loop-Mediated Isothermal Amplification Kit
产品货号：BTN100203
产品规格：50次

本试剂盒可以用于LAMP等温扩增，LAMP即环介导等温扩增，是一种新颖的等温核酸扩增方法。它利用4条模板专一的特异引物和具有链置换能力的DNA聚合酶，在等温条件下(63℃左右)30－60分钟完成扩增(详细反应过程见本页面下方相关产品栏中的LAMP flash)。该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于PCR技术，同时还不需要模板的热变性、温度循环、电泳及紫外观察等过程，不依赖任何专门的仪器设备。目前已成功应用于人类及动植物、细菌、病毒、寄生虫、真菌等病原体的快速检测。

产品特点：
1.高特异性，由于同时使用4-6条特异引物，所以特异性比PCR更高。
2.高扩增效率，扩增效率可达到10E9-10E10，比PCR灵敏一个数量级，可检测到单拷贝的DNA分子。
3. 65℃左右等温扩增，不需要贵重的热循环仪。
4. 即开即用，包含了除引物和模板DNA外的所有成份，十分方便。
5. 肉眼检测扩增结果，不需要昂贵的电泳、荧光PCR等仪器。
6. 提供扩增对照，便于在遇到困难时分析原因。

试剂盒组成：

成分	规格
LAMP Mix(2×)	0.5ml
Bst DNA聚合酶(8U/μL)	75μl
对照引物	20μl
对照模板DNA	5μl
25mM MgCl2	0.2ml
超纯水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在冰上溶解除酶外的各种组份，混匀，稍离心。在反应管中加入以下组份：

成份	样品管	阴性对照
LAMP Mix(2×)	10μl	10μl
FIP引物终浓度	0.8μM	0.8μM
BIP引物终浓度	0.8μM	0.8μM
F3引物终浓度	0.2μM	0.2μM
B3引物终浓度	0.2μM	0.2μM
Loop F引物终浓度(可选项)	0.4μM	0.4μM
Loop B引物终浓度(可选项)	0.4μM	0.4μM
MgCl2(25mM)	3μL	3μL
模板DNA	1-100ng	不加
Bst DNA聚合酶(8U/μL)	1.5μl	1.5μl
补水到	20μl	20μl

注：如在反应管中加入本公司PCR级绿如蓝染料1μL(水则少加1μL)，则可直接在荧光定量PCR仪中进行荧光定量检测。
2. 混匀，置于60-65℃保温30-120分钟。注意：如果不使用Loop引物，则zuì好保温2小时；如果使用Loop引物，则zuì好保温30分钟。
3. 80℃10分钟灭活Bst DNA聚合酶。
4.产物置于-20℃备用或立即用于下游检测。扩增产物可选下列方法之一检测:
a)琼脂糖凝胶电泳。取扩增产物5μl，1-2%的琼脂糖凝胶电泳，可见LAMP特征性电泳图谱；
b)向扩增产物中直接加入本公司PCR级绿如蓝染料(另售)1μL，混匀，稍离心。将反应管置于紫外透射仪或凝胶成像系统中，紫外灯下可见绿色荧光产生；
c)荧光定量检测。
5. 结果分析：
a)如果没有扩增，则需要用阳性对照进行扩增。本试剂盒提供5次阳性对照，反应按下表设置：

成份	阴性对照管	阳性对照管
LAMP Mix(2×)	10μl	10μl
对照引物混合物	4.0μl	4.0μl
对照模板DNA	不加	1μl
MgCl2(25mM)	3μl	3μl
Bst DNA聚合酶(8U/μL)	1.5μl	1.5μl
水	1.5μl	0.5μl

混匀后，置于60℃保温120分钟，其余操作同上。注意：本对照引物中没有Loop引物，所以zuì好保温2小时。
b)如果阳性对照能够扩增出，则说明试剂盒没有问题，可能是模板或引物的问题。如果阳性对照没有扩增出条带，则是试剂盒的问题，请跟厂家联系。

注意事项：
1.引物设计对成功扩增十分关键。除用于SNP分型外，尽量以保守区设计引物。
2.引物至少包括F3/B3和FIP/BIP，加入环状引物F loop/B loop可以使反应速度大大提高。
3. 应优化引物序列、GC含量和尽量避免二级结构。
4.反应中各个引物的浓度及比例对扩增效果有一定的影响。
5. 建议先将所有引物混合在一起，配制成10×浓度以方便使用。
6. LAMP扩增具有特异性好、灵敏度高、时间快、不需要特殊仪器设备等优点。但太高的灵敏度使得其比普通PCR扩增更加容易污染导致假阳性。因此，必须高度重视扩增产物的污染。常规措施包括严格的实验分区、添加UNG和dUTP(可能导致反应效率下降)、使用荧光定量等不开盖检测方法。实验室一旦遭到污染，所有相关试剂必须全部更换，必要时还得更换实验室。
7. 要确证扩增的为目标基因，可以使用特定的限制性酶切和/或Southern杂交。
8. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品等用途。

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货号	名称	规格
BTN91107	SP6体外转录试剂盒	50次
WE0102	2×Taq MasterMix(含染料)	1ml|5ml|25ml
WE0122	FastStar热启动DNA聚合酶	500U|2500U
WE0124	多重PCR Mix	1ml|5ml
JN0007	两步法RT-PCR试剂盒	RT(50次)&PCR(200次)
JN0025	UltraTaq DNA聚合酶	250U

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名称：即用型易错PCR试剂盒
货号：BTN101005
规格：100次
本产品就是专门为广大的研究工作者进行易错PCR而开发。易错PCR是利用Taq DNA多聚酶不具有3′→5′校对功能的特性，在一定条件下(如不同的dNTP浓度、Mg浓度和MnCl2存在)能够按较高的机率引入随机引入突变。如果有适当的选择方法，则可从构建的突变库选出所需突变体。

产品特点：
1. 即开即用，十分简单方便，尤其在生物制药和酶学研究领域显示出了它的优越性。
2. 配方经过精心优化，突变率稳定，突变没有趋向性。易错PCR的突变率为0.66%(±0.13%)，详见使用手册疑难解答。
3. 比体内基因突变更快捷简单，但如果在PCR引物中设计位点，则可使产物克隆到表达载体，也可以用于体内蛋白活性的筛选。
4.可用于连续易错PCR，只需把上一次易错PCR的产物用作下一次易错PCR的模板即可，使每一次获得的小突变累积而产生重要的有益突变。
5. 只适用于扩增1kb以下的产物，对于1kb以上的产物，建议分段扩增。

试剂盒组成：

成分	规格
Taq DNA聚合酶(5U/μL)	100μl
易错PCR Mix，10×	300μl
易错PCR专用dNTP，10×	300μl
MnCl2，5mM	300μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期为一年。

使用方法：
1.以30μL的标准PCR反应体系为例，如果反应体系不是30μL，各成分需要等按比例增加或减少。在一干净的PCR管中，加入下列成分：

易错PCR Mix,10×	3μl
易错PCR 专用dNTP，10×	3μl
MnCl2，5mM	3μl
自备DNA模板(10ng/μL)	1μl
PCR引物(自备，10μm each)	10pmol each
Taq DNA聚合酶(5U/μL)	1-5U
补水到	30μl

2. 按已经优化的PCR条件进行一定循环数的PCR(循环数与突变率的关系见下表)，然后取5μL电泳检查。如果没有优化的PCR条件，一般可以先尝试下面的PCR条件：

PCR前变性	94℃ 3分钟
易错PCR	94℃ 1分钟	循环30次(见注)
	45℃ 1分钟
	72℃ 1分钟

注：易错PCR一般不需要热启动，也不需要在PCR结束后做延伸处理。

循环次数与突变几率的关系
易错PCR循环次数决定每个核苷酸位置的突变几率，进而决定每个PCR产物可能得突变位点数，所以所需循环数由客户根据需要改动。

PCR循环数	每个碱基突变几率	PCR终产物中的突变位点数
		100bp	200bp	400bp	800bp	1600bp
5	0.0033	0.00	0.66	1.3	2.6	5.3
10	0.0066	0.66	1.3	2.6	5.3	11
20	0.013	1.3	2.6	5.3	11	21
30	0.020	2.0	4.0	7.9	16	32
50	0.033	3.3	6.6	13	26	53

3.电泳检测是否得到预计长度的PCR产物。

疑难解答：
Q：易错PCR与定点突变PCR有什么区别？
A：定点突变是指通过聚合酶链式反应(PCR)等方法向目的DNA片段(可以是基因组，也可以是质粒)中引入所需变化(通常是表征有利方向的变化)，包括碱基的添加、删除、点突变等。它需要预先知道靶基因的序列。易错PCR是一种随机突变，它不需要预先知道靶基因的序列(引物结合部分除外)，但需要后续的筛选方法筛选自己所需要的突变。
Q：易错PCR的错误率是多少？
A：易错PCR的突变率为0.66%(±0.13%)，对500bp的PCR产物，相当于有4%的PCR片段为野生型，12%的含一个突变，20%的含两个突变，22%的含三个突变，18%的含四个突变，12%的含五个突变，12%的含六个或更多突变。
Q：如果需要每个核苷酸有高于0.66%的突变率，如何办？
A：可以使用连续多次易错PCR来提高突变率。但zuì好先用胶纯化回收PCR片段,再用于下一轮PCR。此外不能用少于千分之一的次PCR产物作为第二轮易错PCR的模板，否则多样性将受到影响。第三轮易错PCRzuì好使用所有第二轮的PCR产物作为模板，但需要在10mL体系中完成(可以分成很多100μL体系进行)。

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