BTN130986 即用型热启动PCR试剂盒

即用型热启动PCR试剂盒是高品质的核酸扩增(PCR)产品，由北京百奥莱博供应，本产品用于生化实验研究等领域，即用型热启动PCR试剂盒是我司众多优质核酸扩增(PCR)之一，质量堪比同类进口产品，价格非常优惠，目前正热烈促销中，恭候您的咨询订购。...

特别提示：包括即用型热启动PCR试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：即用型热启动PCR试剂盒
英文名称：Instant Hotstart PCR MasterMix
产品货号：BTN130986
产品规格：1.5mL

本产品是即用型的2×高保真PCR预配反应液，含有除引物、模板以外的所有PCR 试剂，包括Pfu DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR 增强剂、上样染料等，特别适合于高保真PCR反应。

产品特点：
1. Pfu DNA聚合酶是使用zuì广泛的高保真酶，其保真度为普通Taq酶的10倍。
2. 使用时只需在加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应，非常方便，简化了PCR的准备工作。
3. PCR反应所必需试剂全集于一管之中，数分钟即可完成反应体系配置。由于加样过程少，有利于减少污染，降低实验误差。
4. 本产品A型含电泳染料，PCR反应液可直接上样电泳，进一步简化了操作。
5. 由于各成分的浓度和比例都经过精心优化，反应的灵敏度高，特异性强。
6.适用于基因的高保真扩增和基因定点突变等实验，得到的PCR产物可用于平末端克隆。

储存条件：低温运输，-20℃保存，保存期限为12个月。

使用方法：
将本产品与用户自备的模板，引物混合液按下列推荐使用量(30μL反应体系)加入PCR 管中即可进行PCR，反应结束后直接取5-15μL电泳检查扩增结果。如果反应体系不是30μL，各成分需要按比例增加或减少。

试剂		加入量
Hotstart PCR Mix		25μL
DNA模板(自备)	哺乳动物基因组DNA	0.5-1μg
	酵母基因组DNA	5-500ng
	细菌基因组DNA	0.5-50ng
	质粒DNA	5-500pg
	PCR回收片段	1-100pg
PCR引物(自备)		10pmol each
补水到		30μL

放入PCR 仪中，根据用户确定的参数进行PCR，扩增结束后取5-10μL上样电泳。
注：用户可按照每1.5mL Hotstart PCR Mix中加入60μl 专用染料的比例将60μl 专用染料加入到1.5mL PCR MagicMix 3.0中，本染料对PCR扩增效率没有任何影响。扩增结束后，可直接取PCR反应液上样电泳，不需要额外再加DNA上样液。

注意事项：
1．如果反应体系不是30μl，各成分需要等按比例增加或减少。
2．如果DNA 模板中有PCR 不明抑制物(植物、土壤和血液等DNA样品常含此类抑制物)，可以在PCR 体系中加入1/10的PCR 抑制物清除剂(BTN60804，30μl 体系中加3μl)，可能会对PCR 有帮助。

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名称：核酸稀释液，测OD专用
货号：BTN131179
规格：250mL
测定核酸的OD需要一定的pH和盐浓度，本产品就是根据这一特点开发的、专门用于溶解和稀释核酸样品的溶液。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

名称：通用型LAMP试剂盒
货号：BTN100203
规格：50次
本试剂盒可以用于LAMP等温扩增，LAMP即环介导等温扩增，是一种新颖的等温核酸扩增方法。它利用4条模板专一的特异引物和具有链置换能力的DNA聚合酶，在等温条件下(63℃左右)30－60分钟完成扩增(详细反应过程见本页面下方相关产品栏中的LAMP flash)。该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于PCR技术，同时还不需要模板的热变性、温度循环、电泳及紫外观察等过程，不依赖任何专门的仪器设备。目前已成功应用于人类及动植物、细菌、病毒、寄生虫、真菌等病原体的快速检测。

产品特点：
1.高特异性，由于同时使用4-6条特异引物，所以特异性比PCR更高。
2.高扩增效率，扩增效率可达到10E9-10E10，比PCR灵敏一个数量级，可检测到单拷贝的DNA分子。
3. 65℃左右等温扩增，不需要贵重的热循环仪。
4. 即开即用，包含了除引物和模板DNA外的所有成份，十分方便。
5. 肉眼检测扩增结果，不需要昂贵的电泳、荧光PCR等仪器。
6. 提供扩增对照，便于在遇到困难时分析原因。

试剂盒组成：

成分	规格
LAMP Mix(2×)	0.5ml
Bst DNA聚合酶(8U/μL)	75μl
对照引物	20μl
对照模板DNA	5μl
25mM MgCl2	0.2ml
超纯水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在冰上溶解除酶外的各种组份，混匀，稍离心。在反应管中加入以下组份：

成份	样品管	阴性对照
LAMP Mix(2×)	10μl	10μl
FIP引物终浓度	0.8μM	0.8μM
BIP引物终浓度	0.8μM	0.8μM
F3引物终浓度	0.2μM	0.2μM
B3引物终浓度	0.2μM	0.2μM
Loop F引物终浓度(可选项)	0.4μM	0.4μM
Loop B引物终浓度(可选项)	0.4μM	0.4μM
MgCl2(25mM)	3μL	3μL
模板DNA	1-100ng	不加
Bst DNA聚合酶(8U/μL)	1.5μl	1.5μl
补水到	20μl	20μl

注：如在反应管中加入本公司PCR级绿如蓝染料1μL(水则少加1μL)，则可直接在荧光定量PCR仪中进行荧光定量检测。
2. 混匀，置于60-65℃保温30-120分钟。注意：如果不使用Loop引物，则zuì好保温2小时；如果使用Loop引物，则zuì好保温30分钟。
3. 80℃10分钟灭活Bst DNA聚合酶。
4.产物置于-20℃备用或立即用于下游检测。扩增产物可选下列方法之一检测:
a)琼脂糖凝胶电泳。取扩增产物5μl，1-2%的琼脂糖凝胶电泳，可见LAMP特征性电泳图谱；
b)向扩增产物中直接加入本公司PCR级绿如蓝染料(另售)1μL，混匀，稍离心。将反应管置于紫外透射仪或凝胶成像系统中，紫外灯下可见绿色荧光产生；
c)荧光定量检测。
5. 结果分析：
a)如果没有扩增，则需要用阳性对照进行扩增。本试剂盒提供5次阳性对照，反应按下表设置：

成份	阴性对照管	阳性对照管
LAMP Mix(2×)	10μl	10μl
对照引物混合物	4.0μl	4.0μl
对照模板DNA	不加	1μl
MgCl2(25mM)	3μl	3μl
Bst DNA聚合酶(8U/μL)	1.5μl	1.5μl
水	1.5μl	0.5μl

混匀后，置于60℃保温120分钟，其余操作同上。注意：本对照引物中没有Loop引物，所以zuì好保温2小时。
b)如果阳性对照能够扩增出，则说明试剂盒没有问题，可能是模板或引物的问题。如果阳性对照没有扩增出条带，则是试剂盒的问题，请跟厂家联系。

注意事项：
1.引物设计对成功扩增十分关键。除用于SNP分型外，尽量以保守区设计引物。
2.引物至少包括F3/B3和FIP/BIP，加入环状引物F loop/B loop可以使反应速度大大提高。
3. 应优化引物序列、GC含量和尽量避免二级结构。
4.反应中各个引物的浓度及比例对扩增效果有一定的影响。
5. 建议先将所有引物混合在一起，配制成10×浓度以方便使用。
6. LAMP扩增具有特异性好、灵敏度高、时间快、不需要特殊仪器设备等优点。但太高的灵敏度使得其比普通PCR扩增更加容易污染导致假阳性。因此，必须高度重视扩增产物的污染。常规措施包括严格的实验分区、添加UNG和dUTP(可能导致反应效率下降)、使用荧光定量等不开盖检测方法。实验室一旦遭到污染，所有相关试剂必须全部更换，必要时还得更换实验室。
7. 要确证扩增的为目标基因，可以使用特定的限制性酶切和/或Southern杂交。
8. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品等用途。

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