HR8685 活性氧检测试剂盒

活性氧检测试剂盒由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于科研目的，我公司专注于细胞凋亡与增殖产品的研发、生产和供应，为您提供的活性氧检测试剂盒质量可靠，批间差小，且价格公道，热切盼望您选购我们的产品。...

特别提示：包括活性氧检测试剂盒(DHE荧光探针法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：活性氧检测试剂盒(DHE荧光探针法)
英文名称：ROS detection kit(DHE probe)
产品货号：HR8685
产品规格：200T

本试剂盒是一种利用荧光探针DHE(Dihydroethidium)进行活性氧检测的试剂盒。可以用于各种真核培养细胞、培养或灌流组织及组织冰冻切片的检测，提供了活性氧阳性对照试剂，以便于活性氧的检测。

DHE可自由透过活细胞膜进入细胞内，并被细胞内的ROS氧化，形成氧化乙啶；氧化乙啶可掺入染色体DNA中，产生红色荧光。根据活细胞中红色荧光的产生，可以判断细胞ROS含量的多少和变化。二氢乙啶在细胞内主要被超氧阴离子型ROS氧化，用流式细胞仪或荧光显微镜可直接观察，是一种快速简便的组织或培养活细胞中ROS经典检测方法。在激发波长535nm，发射波长610nm附近，使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测荧光，从而测定细胞内活性氧水平。

活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括超氧自由基、过氧化氢、及其下游产物过氧化物和羟化物等，参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。

产品特点：
· 使用方便：可用激光共聚焦显微镜直接观察、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测；
· 背景低，灵敏度高；
· 线性范围宽，使用方便。

试剂盒组成：

组分	规格
DHE荧光探针	1ml
活性氧阳性对照诱导剂	1ml

保存条件：-20℃避光，有效期6个月

自备试剂和仪器：
· 培养基
· 移液器及吸头
· 离心机
· 激光共聚焦显微镜或荧光分光光度计或酶标仪或流式细胞仪，激发波长535nm，发射波长610nm。

使用注意事项：
1．螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
2．荧光探针标记后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。
3．探针标记完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的标记情况是否正常。
4．尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。
5．对于药物作用时间较短(2小时以内)的细胞，先标记探针，后用药物刺激细胞。对于药物作用时间较长(6小时以上)的细胞，先用活性氧阳性对照诱导剂或相应的药物刺激细胞，后标记探针。
6．阳性对照诱导剂可以按照1:1000 的比例使用。例如标记好探针的细胞共1ml，可以加入1μl的阳性对照诱导剂刺激。通常刺激后20-30 分钟内可以观察到非常显著的活性氧水平升高。对于不同的细胞，活性氧阳性对照的效果可能有较大的差别。如果在刺激后30 分钟内观察不到活性氧的升高，可以适当提高活性氧阳性对照诱导剂的浓度。如果活性氧升高得过快，可以适当降低活性氧阳性对照诱导剂的浓度。
7．DHE在光照和空气中易被氧化，注意避光密封保存。
8．对不同的细胞和组织，应选择合适的孵育时间和浓度，以观察ROS的变化。

使用方法：

DHE探针标记：
1．DHE 溶液可在新鲜培养液、缓冲盐溶液或组织灌流液中稀释到所需浓度，100～1000倍稀释，以此染色液更换细胞培养液或灌流液；也可直接向细胞孵育液体或灌流液中加入DHE探针溶液至所需浓度。
2．依据细胞ROS含量的不同，DHE 终浓度可选择在100-1000倍稀释的范围，孵育时间可选择10～90分钟，在37℃或室温进行避光孵育。
3．孵育结束后，用新鲜溶液清洗细胞或组织。

荧光显微镜检测：
1．对贴壁生长细胞或活组织，可直接在荧光显微镜下观察；对悬浮生长细胞，取25～50μl细胞悬液滴到一张显微载玻片上，再盖上一张盖玻片。
2．荧光显微镜下，用蓝光或绿光激发，观察和拍摄细胞红色发射图像，ROS阳性细胞在整个核区被染成红色；用紫外光激发时，胞浆中未氧化的二氢乙啶可发出蓝色荧光。

流式细胞仪分析：
1．对贴壁生长细胞，用胰酶消化制备成单细胞悬液；对悬浮生长细胞，直接收集细胞。用0.5～1 ml 冰冷PBS 重悬细胞（5～10万）。
2．采用480～535nm 波长激发，测定590nm～610nm 以上的发射，细胞应可分成两个亚群：ROS阴性细胞仅有很低的荧光强度，ROS阳性细胞有较强的红色荧光。

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YT893 Hoechst 33258染色液 10ml|50ml
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名称：细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒（MTT法）
货号：YT122
规格：500次
本试剂盒被广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测。MTT可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成结 晶状的深紫色产物formazan。在特定溶剂存在的情况下，可以被完全溶解。然后通过酶标仪可以测定570nm波长附 近的吸光度。细胞增殖越多越快，则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。
本试剂盒采用了独特的Formazan溶解液配方，无需去除原有的培养液，可 以直接加入Formazan溶解液溶解formazan。从而避免了由于去除培养液时formazan被部分去除而引起的误差。本试剂盒本底低，灵敏度高，线性范围宽，使用方便。

试剂盒组份：
MTT——————25mg
MTT溶剂——————5ml
Formazan溶解液——55ml

注意事项：
1. 由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发的问 题。一方面，由于96孔板周围一圈zuì容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加PBS，水或培养液；另一方面 ，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。
2. MTT溶剂在低温情况下会凝固，使用前请室温放置或20-25℃水浴温育片刻 至全部融解后使用。
3. MTT配制成溶液后为黄色，需避光保存，长时间光照会导致失效。当颜色 变为灰绿色时，请勿使用。MTT溶液在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固，可以20-25℃水浴温育片刻至全部融解 后使用。
4. Formazan溶解液结冻或产生沉淀时可以37℃水浴孵育以促进溶解，并且必 须在全部溶解并混匀后使用。

储存条件：4℃，有效期一年。

名称：细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒
货号：YT129
规格：50次
本试剂盒是一种采用经典的碘化丙啶染色方法进行细胞周期与细胞凋亡分析的检测试剂盒。本试剂盒足够检测50个样品，每个样品的细胞数量可以为10-100万。

试剂盒组份：
染色缓冲液——————25ml
碘化丙啶染色液(20X)——————1.25ml
RNase A(50X)——————0.5ml

碘化丙啶(Propidium，简称PI)是一种双链DNA的荧光染料。碘化丙啶和双链DNA结合后可以产生荧光，并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。细胞内的DNA被碘化丙啶染色后，可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定，然后根据DNA含量的分布情况，可以进行细胞周期和细胞凋亡分析。

碘化丙啶染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及发生DNA片段化(DNA fragmentation)导致部分基因组DNA片段在染色

细胞发生凋亡时，由于胞浆和染色质浓缩、核碎裂，产生凋亡小体，使细胞的光散射性质发生变化。在细胞凋亡的早期，细胞对前向角光散射的能力显著降低，对侧向光散射的能力增加或没有变化。在细胞凋亡的晚期，前向和侧向光散射的信号均降低。因此可通过流式细胞仪测定细胞光散射的变化观察细胞凋亡情况。

本试剂盒通常应用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测。如果用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测，则必须把组织消化成单细胞状态，才可以进行检测。

注意事项：
1. 本试剂盒需使用流式细胞仪进行检测。
2. 需自备PBS和70%乙醇，PBS。
3. 荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

储存条件：-20℃避光，有效期一年。

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