ALH082 酵母质粒小量提取试剂盒

酵母质粒小量提取试剂盒由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品仅用于生物化学研究方面，本品质量稳定，价位合理，需要酵母质粒小量提取试剂盒等DNA提取纯化产品的客户，欢迎您的随时垂询。...

特别提示：包括酵母质粒小量提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：酵母质粒小量提取试剂盒
英文名称：Yeast high purity plasmid small amount rapid extraction kit
产品货号：ALH082
产品规格：50次

本试剂盒适用于酵母小规模高纯度质粒制备。采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞并结合lyticase特异消化酵母细胞壁，能在1小时内从酵母培养液中分离出高纯度质粒DNA。酵母收集后,加入破壁酶去除细胞壁后,然后碱裂法裂解细胞，离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低PH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除， zuì后低盐、高PH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。

试剂盒组份(50次)：
RNaseA(10mg/ml)—————————150μl
Lyticase————————————2500U
溶液YP1—————————————15ml
溶液YP2—————————————15ml
溶液YP3—————————————20ml
去蛋白液PD———————————25ml
漂洗液WB————————————15ml
洗脱缓冲液EB——————————15ml
吸附柱和收集管(2ml)———————50套

试剂盒特点：
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯fǎng等试剂，也不需要乙醇沉淀。获得的质粒产量高、纯度好，可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。

注意事项
1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 溶液YP3和去蛋白液PD中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
3. 通常酵母质粒拷贝数都很低，高拷贝质粒zuì大得率一般为每5 ml 培养物提取1μg左右的质粒。用于下游试验时通常建议使用量为：1-5μl用做PCR 模板;5-10μl 用于转化大肠杆菌,选择率的感受态细胞。
4. 得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260值为1相当于大约50μg/ml DNA。电泳可能为单一条带，也可能为2条或者多条DNA条带，这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成， 与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。本公司产品正常操作情况下基本超螺旋可以超过90%。
5. 用户需要自备Sorbitol buffer( 1M 山梨醇， 0.1M Na2EDTA，14 mMβ-巯基乙醇)。配制方法：在600 ml 去离子水里面溶解182.2 克山梨醇，加入200 ml 0.5 M Na2EDTA (pH 8.0) ，不需要调节PH 值，定容到1L，4℃保存。临用前加0.1%β-巯基乙醇(商品化的β-巯基乙醇摩尔浓度一般为14M)。
6. 菌体浓度检测一般OD600值为1的时候,酿酒酵母细胞是1-2×10^7cells/ml，由于菌种和分光度计不同即使同样细胞数量OD值变化也很大，以上仅供参考。
7. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保批pH大于7.5， pH过低影响洗脱效率。用水洗脱质粒应该保存在－20℃。质粒DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。

储存条件：室温，有效期12个月。


本制品别名：高纯度酵母质粒提取试剂盒|高纯度酵母质粒制备试剂盒|
酵母质粒小量提取试剂盒|酵母质粒小量制备试剂盒

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货号	名称	规格
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BTN80803	柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR级)	50次
BTN60912	非酶RNA清除剂2.0	1.5mL
BTN140405	细菌内毒素标准品(10EU/支)	10支
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WE0399	游离DNA样本保存管(10ml，PET)	5ml×5支|5ml×50支

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名称：固定组织基因组DNA提取试剂盒
货号：WE0171
规格：50次
  本试剂盒适用于从福尔马林固定、石蜡包埋的组织中有效纯化总DNA，包括基因组DNA和线粒体DNA。本品使用专门优化的裂解液和蛋白酶K，释放福尔马林固定或组织切片样本中的DNA，无需过夜操作；消化后的样品在较高的温度孵育后，去除由福尔马林交联造成的抑制作用，有效提高DNA的产量和纯度；优化的缓冲系统使裂解液中的DNA可特异结合到硅胶吸附膜上，而其他污染物可流过膜；PCR和酶反应的抑制剂以及残留的杂质可通过两步漂洗步骤有效去除，zuì后使用低盐缓冲液或水洗脱，即可获得高纯度DNA。经过纯化的DNA可以直接用于PCR、Real-time PCR、SNP基因分型、STR基因分型和药物基因组学研究等。

试剂盒组成：

组份	50次
Buffer GTL	15ml
Buffer GL	15ml
Buffer GW1(浓缩液)	13ml
Buffer GW2(浓缩液)	15ml
Buffer GE	15ml
蛋白酶K	25mg
蛋白酶K 储存液	1.25ml
吸附柱DS及收集管	50套

自备试剂：无水乙醇、10mM PBS(PH7.4)(固定液中的组织)。

实验前准备及重要注意事项：
1、向蛋白酶K 中加入1.25ml 蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
2、获得样品后，要尽快将样品在4%-10%的福尔马林中固定，固定时间以14-24小时为宜，时间过长易导致基因组断裂，影响下游实验。
3、确保包埋前的样品彻底脱水，残留的福尔马林会抑制蛋白酶K 的作用。
4、次使用前应按试剂瓶标签说明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
5、使用前请检查Buffer GTL和Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer GL和Buffer GTL于56℃水浴重新溶解。
6、如果下游实验对RNA污染比较敏感，可以在加入Buffer GL前加入4μl DNase-Free的RNase A(100 mg/ml)，RNase A本试剂盒并未提供，如果需要可单独向本公司订购，货号：WE0225S。

操作步骤：
1、样本处理：
a. 石蜡包埋样本：用手术刀将组织块中多余的石蜡修剪掉，露出组织。
b. 福尔马林等固定液中的样本：取约20 mg的样本，切成小块，置于离心管中，加入500μl 10mM PBS(PH7.4),涡旋振荡，12000rpm(～～13400×g)离心1分钟，重复3次，可直接进行第7步操作。
2、将组织块切成5-10μM的薄片。
注意：如果样品表面已经暴露在空气中，请将接触空气的2-3片弃掉不用。
3、取约1×1cm2的切片(共约4-5片切片)置于离心管(自备)中，加入1ml二甲苯，盖紧管盖，涡旋震荡10秒。
4、12000rpm离心2分钟，小心吸弃上清，注意不要吸弃沉淀。
5、加入1ml无水乙醇，涡旋震荡混匀。12000rpm离心2分钟，弃上清，注意不要吸弃沉淀。
注意：乙醇可以除去样品中残余的二甲苯。
6、打开管盖，室温或zuì高至37℃孵育10分钟，直至无乙醇残留。
7、加入180μl Buffer GTL，重悬沉淀；加入20μl 蛋白酶K ，涡旋震荡混匀。
8、56℃孵育1小时，直至样品完全溶解。90℃孵育1小时。短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
注意：
1)此步骤的目的是修复由甲醛变性的核酸，孵育的温度过高或时间过长可能造成DNA断裂，产生DNA碎片。
2)56℃孵育后的样品可置于室温，直至水浴锅或干浴锅温度达到90℃后再把样品置于90℃孵育。
3)如需除去RNA，可将样品温度降到室温后，加入4μl浓度为100 mg/ml 的RNase A溶液(货号：WE0225S)，震荡混匀，室温放置5-10分钟。
9、加入200μl Buffer GL，涡旋震荡彻底混匀。加入200μl无水乙醇，涡旋震荡彻底混匀。短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
注意：
1)加入Buffer GL和无水乙醇后要立即充分混匀。
2)如果需要对多个样品进行操作，可以将Buffer GL和无水乙醇事先混匀后加样。
10、将步骤9所得溶液全部加入已装入收集管的吸附柱中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
11、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
12、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
13、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟以彻底晾干。
注意：这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续酶促反应(酶切、PCR等)。
14、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中，向吸附柱的中间部位悬空加入20-100μl Buffer GE或灭菌水，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3)用另外的20-100μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
4)如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤14所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，重复步骤14；若洗脱体积小于100μl，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg，推荐用20μl Buffer GE或灭菌水洗脱。
5)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。

储存条件：室温(15～30℃)。

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