SY0036 热启动Taq DNA聚合酶

北京百奥莱博供应的热启动Taq DNA聚合酶仅用于生物化学研究方面，热启动Taq DNA聚合酶是我司众多优质核酸扩增(PCR)之一，质量堪比同类进口产品，价格非常优惠，目前正热烈促销中，恭候您的咨询订购。...

特别提示：包括热启动Taq DNA聚合酶(含Taq酶抗体)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：热启动Taq DNA聚合酶(含Taq酶抗体)
英文名称：HotStart Taq DNA Polymerase
产品货号：SY0036
产品规格：100U|500U|3000U

本制品是Taq抗体和Taq DNA Polymerase(货号：SY0024)的混合产品。Taq抗体与Taq酶具有很高的亲和力，高温50℃处理30 min，依旧可以封闭Taq酶的活性。本品在预变性温度下加热30秒完全失活，释放出DNA聚合酶活性。使用该热启动taq酶可以有效抑制引物非特异性退火导致的扩增。

本制品适用于热启动PCR和qPCR。本品中的Taq DNA聚合酶是热稳定重组型DNA聚合酶，具有较高的模板亲和力，非常适合低拷贝模板的扩增。扩增产物具有3"-dA，可轻松克隆用于T载体。

产品组成：

组分	100U	500U
HotStart Taq DNA Polymerase(5U/μl)	20μl	100μl
HotStart Taq Buffer(含Mg2+、dNTP)	1ml	1ml×5

保存条件：-20℃保存，有效期2年。

活性定义：
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，74℃，30 min内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。

PCR反应体系(50μl)：

组分	体积	终浓度
HotStart Taq Buffer(含Mg2+、dNTP)	25μl	1×
模板DNA	适量	-
正向引物(10μM)	2μl	0.4μM
反向引物(10μM)	2μl	0.4μM
Taq DNA Polymerase (5 U/μL)	0.5μl	2.5U/50μl
ddH2O	补水至50μl	-

注意：
1）试剂使用：各组分使用前需充分融化混匀。
2）聚合酶浓度：推荐使用2.5 U/50μL。可以在1.25-5 U/50μL之间进行优化。
3）Mg2+终浓度：体系终浓度为2 mM。如有特殊需要，可用25mM MgCl2，以0.2-0.5mM为间隔向上摸索。
4）不同模板的推荐使用量（50μL反应体系）：

模板种类	模板使用量
基因组DNA	50ng-200ng
质粒DNA	100pg-20ng
cDNA	1-5μL(不超过反应体系的1/10)

PCR扩增程序：

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	1 min	1
变性	95℃	10 sec	35-40
退火	60℃	20 sec
延伸	72℃	30 sec/kb
终延伸	72℃	10 min	1

注意：
1）退火温度和时间：温度推荐使用50-60℃。退火温度过低会导致非特异性扩增。引物设计参考荧光定量引物标准。推荐退火时间设置为20sec，可以在10-30sec内调节。
2）延伸温度和时间：温度推荐使用72℃。时间推荐使用30 sec/kb。
3）扩增产物：请将PCR扩增产物放置于-20℃保存，防止DNA发生降解。
4）扩增程序：本产品用于定量实验，可使用2步法程序扩增，去掉延伸步骤，退火和延伸合为一步，对应的时间常用30 sec或根据仪器型号设置，如Applied Biosystems 7300需用31 sec以上。

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名称：PCR抑制物清除剂
货号：BTN60804
规格：1mL
用血液、土壤、植物、中药材等样品中提取的DNA 经常含有会抑制PCR的产物。本产品专门用于解除这些PCR 抑制剂的抑制作用，使DNA 能够用于PCR扩增。

产品特点：
1. 使用简单，直接加入PCR反应体系中使用。
2.适用范围广，可以用于解除血液、土壤、植物、中药材等DNA样品中的PCR 抑制剂。

低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：将本产品按1：10的比例加入到PCR反应体系中即可进行PCR，如果PCR反应体系为50μL，则需要加本产品5μL。

名称：YT Taq DNA聚合酶(Taq酶)(含buffer)
货号：YT373
规格：200U|1000U
YT Taq DNA Polymerase简称YT Taq酶，是一种兼顾了高保真性和高扩增效率的DNA聚合酶，是我司优先推荐的基因PCR克隆用酶。

YT Taq 酶可以催化5’至3’方向的依赖于DNA模板的脱氧核苷酸的聚合。同时YT Taq 酶有3’至5’的外切酶活性(proofreading activity)。另外，YT Taq 酶有5’至3’外切酶活性，但YT Taq 酶没有反转录酶活性。

由于YT Taq 酶有3’至5’的外切酶活性，因此在PCR扩增过程中出错的几率大大降低，出错率为1.6×10-6，略低于Pfu酶的2.6×10e-6
。
YT Taq 酶的DNA扩增效率大大高于Pfu酶，和Taq酶的扩增效率比较接近。因此YT Taq 酶很好地兼顾了扩增效率和扩增的准确性。

用途：高保真PCR (high fidelity PCR)、点突变、T载体克隆等各种常规PCR反应。
1)用YT Taq 酶扩增产生的PCR产物带有3’-dA overhangs，可以用于基于T载体的PCR片断克隆。
2)YT Taq 酶可以扩增长度达5kb的DNA片断，zuì长可以扩增长达10kb的DNA片断。通常适合扩增3kb以下的DNA片断。

活性定义：One unit of the enzyme catalyzes the incorporation of 10 nmol of deoxyribonucleotides into a
polynucleotide fraction (adsorbed on DE-81) in 30 min at 72℃. Enzyme activity is assayed in the following mixture: 20 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 2 mM MgSO4, 10 mM (NH4)2SO4, 10 mM KCl, 0.1% (v/v) Triton X-100, 0.1 mg/ml BSA, 0.75 mM activated calf thymus DNA, 0.2 mM of each dNTP, 0.4 MBq/ml [3H]-dTTP.

纯度：不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶，不含RNA酶，满足常规PCR反应要求。

酶储存溶液：20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.1% (v/v) Nonidet P40, 0.1% (v/v) Tween 20 and 50% (v/v) glycerol。
10×YT Taq Buffer (with Mg2+)：200 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 100 mM (NH4)2SO4, 100 mM KCl, 20mM MgSO4, 1% (v/v) Triton X-100, 1 mg/ml BSA。

失活或抑制：酚氯fǎng抽提可以使YT Taq 酶失活。

储存条件：-20℃

注意事项：
1）由于PCR反应非常灵敏可以扩增目的基因序列超过1000万倍，在使用YT Taq 酶时请注意避免微量待扩增DNA的污染，并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。
2）YT Taq 酶有3’至5’的外切酶活性，在没有dNTP的情况下可以降解引物。因此YT Taq 酶一定要zuì后加入，并且要在冰浴上操作。

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