MQ0028 BJ5183电击感受态细胞

北京百奥莱博供应的BJ5183电击感受态细胞用于科学研究，我公司的BJ5183电击感受态细胞品质上佳，经过多年的开发生产，已然非常成熟，欢迎广大新老客户订购。...

特别提示：包括BJ5183电击感受态细胞在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：BJ5183电击感受态细胞
英文名称：BJ5183 Electroporation-Competent Cell
产品货号：MQ0028
产品规格：5×50μl/20×50μl

BJ5183是一种具有较高重组活力的大肠杆菌菌株，是目前腺病毒系统zuì常用的感受态细胞。
BJ5183菌株含有sbcBCrecBC双重突变，赋予BJ5183细胞较强的重组能力，有利于转入的目的基因与腺病毒质粒{pAdeasy-1[encodes the Adenovirus-5 genome(E1/E3 deleted)]或pAdeasy-2[encodes the Adenovirus-5 genome(E1/E3/E4 deleted)]}的重组。endA1(缺失核酸内切酶)的突变有利于重组DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。Strr赋予BJ5183菌株链霉素抗性。
BJ5183电击感受态细胞适用于普通质粒和大质粒的构建，经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>1010cfu/μg DNA。
保存条件：-80℃
基因型：
endA1sbcBCrecBCgalKmet thi-1bioThsdR(Strr)
操作说明：
1.0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。
2.取-80℃保存的BJ5183电击感受态细胞插入冰中5分钟，待其融化，加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。
A.测定转化效率使用1 μl 10 pg/μl的对照质粒pUC19；
B.对于连接产物，请用乙醇沉淀DNA后加入适量TE缓冲液(10 mM Tris HCl，pH7.5;1 mM EDTA)重悬，DNA浓度不超过100 ng/μl，体积不超过5 μl/50 μl感受态。
3.用200 μl枪头(用刀切除0.5cm枪尖)将感受态-DNA混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。
4.启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV(此为BioRad电转仪推荐参数，也可按所用电转仪推荐的参数操作)，将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。
5.2分钟后从冰中取出电击杯，放室温，加入700 μl不含抗生素的无菌S.O.C.培养基(室温)，用1ml枪吹吸电击杯底部数次混匀后，转移到50 ml离心管(BD Falcon 50 ml锥形离心管等)，向离心管中补加S.O.C.培养基至10ml。37℃，225 rpm复苏60分钟。
6.5000 rpm离心一分钟收菌，重悬后取100-200μl涂布到含相应抗生素的S.O.C平板上(因菌量较大，若全部涂板请选用直径15cm培养皿2-5个)。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
注意事项：
1.加入DNA时体积不应大于感受态体积的1/10。
2.电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。
3.当DNA不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。
4.电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和DNA的溶液中产生电流和弧光放电的风险。
5.若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
6.对于连接产物转化，zuì好转化前乙醇沉淀DNA后用适量TE缓冲液(10 mM Tris HCl，pH7.5;1 mM EDTA)重悬产物，保证 DNA浓度不超过100ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。
7.混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时避免用力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少zuì终用于涂板的菌量。
8.电击感受态细胞zuì好保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。

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货号	名称	规格
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名称：λDNA
货号：BTN90407A
规格：5μg
本产品Lambda DNA(λDNA)为λ噬菌体中的DNA，是一种常见的DNA底物，分子量为31.5×106Da/48502bp，浓度为200～500μg/ml。A型为普通Lambda DNA。B型为不含N6-甲基腺嘌呤Lambda DNA。C型为非甲基化的cl857 Sam7 λDNA，是从感染的大肠杆菌GM119菌株中分离得到的。该菌株缺乏dam及dcm甲基化酶活性。非甲基化的λDNA以作为对DNA甲基化敏感的限制性酶的底物。

储存溶液：Tris-HCl(pH8.0)10mM；EDTA 1mM

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期一年。

纯度：
1. OD260nm/280nm＞1.8。
2. 琼脂糖凝胶电泳出现清晰单一条带。
3. 1μg的λDNA在Hind III酶切Buffer中37℃保温16小时后，琼脂糖凝胶电泳时出现清晰单一条带。
4. 1g的λDNA 用Hind III酶切(37℃，2小时)后，在琼脂糖凝胶电泳时出现8条清晰的DNA电泳带。

名称：裂殖酵母化学感受态细胞制备试剂盒
货号：BTN100103A
规格：20次
本裂殖酵母化学感受态细胞制备试剂是一种通过化学处理，快速制备裂殖酵母化学感受态细胞，用于长期冻存以备后续转化的产品。

产品特点：
1.一次制备，-80℃保存，多次使用，免去每次转化都要制备裂殖酵母感受态细胞。
2. 操作简单，单溶液制备，除酵母培养的时间外，整个操作只需要30分钟。
3. 主要用于裂殖酵母S. pombe ，其他多种实验用酵母菌株zuì好选用酵母化学感受态细胞制备试剂(BTN81109)。
4. 受体酵母可以不含质粒，也可用于携带有选择性质粒的酵母(如双杂交体系中的酵母)。
5. zuì高转化效率可达到0.2-1×105个转化子/μg质粒DNA。
6. 得到的感受态细胞可以用各种线性或环状酵母穿梭质粒DNA进行转化，例如YIp，YRp，YCp，YEp和YAC等。
7.可以用于酵母双杂交、定点突变、基因破坏、等位突变基因修复等实验。
8. 本产品可以制备20只裂殖酵母感受态细胞(需要100mL裂殖酵母培养液)，其中A型只用于制备感受态细胞，B型还带转化液。

试剂盒组成：

组分	BTN100103A	BTN100103B
溶液A	1ml	1ml
裂殖酵母转化液	-	一套(20次)
使用说明书	1份	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

使用效果：
将一个酵母菌落接种到SLD培养基中，30℃摇晃培养直到OD600达到0.6-1.0，冰浴15分钟后离心弃上清，用自备无菌水洗涤三次，然后用相当于菌液zuì初体积百分之一的溶液A重悬，按每管50μl分装，放-80℃保存。

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