MQ0064 Y2HGold酵母感受态细胞

Y2HGold酵母感受态细胞是高品质的克隆与表达产品，由北京百奥莱博供应，本产品用于生化实验研究等领域，本产品质量好，且具价格，深为用户称道，了解更多Y2HGold酵母感受态细胞等克隆与表达产品请联系我司咨询订购。...

特别提示：包括Y2HGold酵母感受态细胞在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Y2HGold酵母感受态细胞
英文名称：Y2HGold Chemically Competent Cell
产品货号：MQ0064
产品规格：10×100μl/50×100μl

Y2HGold菌株是GAL4系统酵母双杂实验用菌株，MATa型，可直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过mating操作进行蛋白互作验证或筛库试验。
Transformation marker为：trp1，leu2，报告基因为：AbAr，HIS3，ADE2，MEL1。
Y2HGold-GAL4酵母双杂系统需要两种质粒配套使用：PGBKT7和PGADT7。
质粒PGBKT7的筛选标志为TRP1，用于表达DNA-BD(来自酵母转录因子GAL4N端1~ 174位氨基酸)与目标蛋白(Bait)的融合蛋白；质粒PGADT7的筛选标志为LEU，用于表达AD(GAL4 C端768 ~881位氨基酸)与目标蛋白(Prey)的融合蛋白。
GAL4系统原理：一个完整的酵母转录因子GAL4可分为功能上相互的两个结构域：位于N端1 ~174位氨基酸区段的DNA结合域(DNA-BD)和位于C端768 ~881位氨基酸区段的转录激活域(AD)。
DNA-BD能够识别GAL4-responsive gene的上游激活序列UAS，并与之结合。
而AD可以启动UAS下游的基因进行转录。BD和AD单独存在不能激活转录，但当二者接近时，则呈现完整的GAL4活性，使含有UAS的启动子下游基因转录表达。正常条件下，BD不与AD结合，将要检测的蛋白质分别与BD和AD融合，形成bait融合蛋白(bait-BD)和prey融合蛋白(prey-AD)，如果bait和prey发生相互作用，就会促使BD和AD的相互接近，形成完整的GAL4，从而激活报告基因的转录。
Y2HGold有四个报告基因：AbAr，HIS3，ADE2，MEL1，分别由三种不同的启动子(G1，G2，M1)启动，这三种启动子只有GAL4识别的17bp核心区相同，其余部分均不同，大大降低了酵母双杂假阳性发生的概率。此外新报告基因AbAr与以前的营养缺陷报告基因相比具有更低背景的优点，也可以降低酵母双杂假阳性发生的概率。Y2HGold感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存三个月，经PGADT7质粒检测转化效率>104cfu/μg DNA。
保存条件：-80℃
基因型：
MATa，trp1-901，leu2-3，112，ura3-52，his3-200，gal4Δ，gal80Δ,LYS2：：GAL1UAS–Gal1TATA–His3，GAL2UAS–Gal2TATA–Ade2 URA3：：MEL1UAS–Mel1TATA AUR1-C MEL1
操作说明：
1.取100μl冰上融化的Y2HGold感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5μg，Carrier DNA(95-100度5min,快速冰浴，重复一次)10 μl，PEG/LiAc 500μl并吸打几次混匀，30度水浴30分钟(15 min时翻转6-8次混匀)。
2.将管放42度水浴15min(7.5 min时翻转6-8次混匀)。
3.5000 rpm离心40s弃上清，ddH2O 400μl重悬，离心30s弃上清。
4.ddH2O 50μl重悬，涂板,29℃培养48-96h。
注意事项：
1.感受态细胞zuì好在冰上融化。
2.转化高浓度的质粒可相应减少zuì终用于涂板的菌量。
3.同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。
4.Y2HGold酵母菌株对高温敏感，zuì适生长温度为27-30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。
5.菌落变粉不是污染，是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后，平板上的Adenine被酵母消耗完毕，酵母试图通过自身代谢途径合成Adenine以供利用，然而，Y2HGold的ADE2基因被破坏，Adenine合成途径受阻；又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常，所以造成中间产物P-ribosylamino imidazole(AIR)在细胞中积累而使菌落变为粉红色。
6.酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板29℃，48h培养可见直径1mm克隆；涂SD单缺平板29℃，48-60h培养可见直径1mm克隆，涂SD双缺平板29℃，60-80h培养可见直径1mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90h培养可见直径1mm克隆。

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名称：大肠杆菌BL21 Star(DE3)化学感受态细胞
货号：BTN150801
规格：10*100μL
 BL21 Star(DE3)感受态细胞来源于BL21(DE3)菌株，由特殊工艺制作，使用pUC19质粒检测本产品，转化效率可达10cfu/μg。
 BL21 Star(DE3)菌株的特点是含有rne131基因突变体。rne131突变基因能够增强菌株细胞内mRNA的稳定性，从而有效提高蛋白表达能力。本产品主要适用于T7启动子表达载体(如pET 系列)的高水平蛋白表达。
 菌株基因型为：F-ompT hsdSB(rB-mB-)gal dcm rne131(DE3)。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、LB培养基等。

使用方法：
1.从-80℃冰箱中取出感受态细胞，置于冰上解冻。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，可以根据实际情况分装使用。以下实验以100μL感受态细胞为例。
2. 取 100μL冰上融化的BL21 Star(DE3)感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。
3. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
4. 向离心管中加入700μL不含抗生素的无菌培养基(LB)，混匀后37℃，200rpm 复苏60分钟。
5. 取100μL左右菌液涂布于含相应抗生素的LB培养基上。如果转化高浓度的质粒，可以减少涂布的量。
6. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

名称：大肠杆菌SURE化学感受态细胞
货号：BTN90208
规格：0.1mL*10
本产品是采用大肠杆菌SURE菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。该菌株主要是用来克隆不稳定DNA结构如重复序列、二级结构(如Z-DNA)等。

菌株基因型：

基因型	表现型
endA1	核酸内切酶I缺失
gyr A96	具有萘啶酮酸抗性
lac	不能利用乳糖
rec B & rec J	DNA重组修复功能缺失
relA1	允许在无蛋白质合成时有RNA合成
sbcC	允许基本重组
supE44	抑制琥珀突变，为某些噬菌体必需
thi-1	需要硫氨才能生长
umuC::Tn5	卡那霉素抗性
uvr C	不能切除变异碱基
mcrA△(mcr CB-hsdSMR-mrr)171	DNA甲基化系统缺失
F’[ lacIlac Z△M15 Tn10 proAB+]	提供α-互补所需的ω片断，具有四环素抗性

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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