WH0196 pTG-T载体快速连接试剂盒

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特别提示：包括pTG-T载体快速连接试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：pTG-T载体快速连接试剂盒
英文名称：pTG-T-vector Fast Ligation Kit
产品货号：WH0196
产品规格：20μl|60μl

本试剂盒中的Fast pTG-T载体是一种克隆PCR产物的专用载体，经由克隆质粒在XcmI内切酶酶切后得到的带3" T突出末端的线性化载体，通过该方法产生的带有3" T突出末端的线性化载体效率远高于传统酶切加尾法。由于大部分耐热聚合酶反应时都会在PCR产物的3"端添加一个A，可与T-Vector 3"端的T互补连接。

试剂盒中配备了的Rapid Ligation Mix（目录号：WH0193）为的T4 DNA连接酶反应试剂，其中含有连接增强剂、酶稳定剂，可大大缩短连接时间、提高PCR产物的连接和克隆效率。

产品特点：
·快速：5min快速连接，阳性率近。
·灵敏广泛：适合低至0.025pmol浓度片段和长至8 kb片段的连接。
·操作便捷：配合使用RapiLigation Mix，只需加入载体和片段即可进行连接反应。

试剂盒组成：

组分	WH0196-1	WH0196-2
Fast pTG-T-Vector	20μl	60μl
Rapid Ligation Mix（2×)	100μl	100μl×3
Control Insert DNA（688bp)（50ng/μl)	10μl	10μl
ddH2O	1ml	1ml

保存条件：-20℃保存1年，避免反复冻融。（载体和连接试剂可以适当的分装成小份，防止反复冻融，以保证质量）。

不同片段使用量：
载体与片段的摩尔比控制在1:3～1:10，请根据凝胶电泳或紫外分光光度计检测后的浓度和片段长度来计算其摩尔比。插入片段用量，可根据以下公式粗略计算：
插入片段用量ng=（3～10)×（插入片段长度/载体长度
)×载体用量ng
连接体系中50ng的载体，不同大小的PCR产物zuì佳加入量举例如下：

PCR产物长度	zuì佳的使用量
700bp	35ng
2000bp	100ng

反应体系：标准体系为10μl体积，5μl的反应体系也能取得很好的效果，试剂用量减半。

载体图谱：



注意事项：
1．连接使用的PCR片段3"端应带有A末端，如果是使用pfu等高保真聚合酶扩增的不带A末端的平末端片段，可选用零背景快速克隆试剂盒（WH0191/WH0192）或Fast pTG-T平末端连接试剂盒（WH0213）进行连接反应。
2.转化过程中使用Control Insert DNA做对照是非常必要的，在实验出现问题时可以确定原因。
3.建议留下部分连接产物，在出现问题后能迅速的补救，减少不必要的重复实验。
4.涂布用量可根据具体实验作相应调整。如转化的DNA总量较多，可取更少量转化产物涂布平板；反之，如转化的DNA总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少，可通过离心（4000rpm，2 min）后吸除部分培养液，留下适量的培养基悬浮菌体后将其涂布于一个平板中（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板）。

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