WE0249 TA快速连接试剂盒(pUC-T)

TA快速连接试剂盒(pUC-T)由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品用于科研目的，本品质量稳定，价位合理，需要TA快速连接试剂盒(pUC-T)等克隆与表达产品的客户，请到我公司官网联系我们。...

特别提示：包括TA快速连接试剂盒(pUC-T)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：TA快速连接试剂盒(pUC-T)
英文名称：pUC-T TA Cloning Kit
产品货号：WE0249
产品规格：20次

  pUC-T TA载体是一种克隆PCR产物的专用载体，它是由pUC18载体在EcoR V酶切位点处切开，在两侧的3"端添加T而成。由于大部分耐热聚合酶反应时都会在PCR产物的3"端添加一个A，它可以与pUC-T 3"端的T互补连接，因此可大大提高PCR产物的连接和克隆效率。
  试剂盒中配备率的T4 DNA Ligase和为快速DNA连接优化的2×Quick Ligation Reaction Buffer。连接效率相当于用T4 DNA Ligase 进行常规连接1小时。带有插入片段的重组子可根据α互补原理，进行蓝白斑筛选，判断载体中有无外源基因的插入。克隆后可以用BcaBEST Sequencing Primers和 M13通用引物对PCR产物进行测序。

试剂盒组成：

组份	20次
pUC-T(50ng/μl)	20μl
Control Insert(50ng/μl)	10μl
Quick T4 DNA Ligase	20μl
2×Quick Ligation Reaction Buffer	120μl

注意事项：

1、Insert DNA 要求
1)连接使用的PCR片段3’末端应带有“A”尾。有些高保真DNA聚合酶，如我公司的Pfu扩增的PCR产物是平滑末端，可使用加A试剂盒加上A尾后，再进行T载体克隆。
2)PCR产物建议进行切胶回收纯化后再进行T载体克隆，以免PCR产物中的非特异片段或残存引物等杂质影响。推荐使用WE0168快速琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒。

2、连接反应要求
1)本试剂盒能使大多数连接反应在25℃条件下5分钟甚至更短时间内达到反应终点，增加反应时间反应效率不会增强。如用快速连接反应1小时后，转化效率会明显降低；如25℃快速连接反应过夜，则转化效率会下降到75%。
2)2×Quick Ligation Reaction Buffer含有ATP，使用前置于冰上使其融化后充分混匀，建议初次使用分装成小管冻存，避免其反复冻融影响DNA连接效率。
3)由于T4 DNA Ligase中含有甘油，比较粘稠容易挂壁，建议使用之前短暂离心将液体收集到管底，取样时枪头尽量不要深入液面太深，以免粘在枪头上造成损失。
4)如快速连接产物用于电转，因快速连接反应体系中的PEG会影响电转效率，建议使用离心柱将连接产物进行DNA纯化(如WE0170快速DNA产物纯化试剂盒)后再进行电转。

3、感受态细胞要求
建议使用的热击转化感受态细胞，这样才可能得到比较理想的阳性克隆，如需进行蓝白筛选，宿主细胞必须具有正确的基因型(F´编码的【lacZ ΔM15】)产生ω片段，才能与载体DNA产生的LacZ α 多肽结合，表现出β-半乳糖苷酶活性(α互补)。pUC-T TA载体以pUC18载体为基础构建而成，因此，适合pUC18载体的感受态细胞都可以使用。推荐使用本公司WE0251 0感受态细胞、WE0252 DH5α感受态细胞。

4、阳性克隆筛选
阳性DNA片段成功插入至pUC-T Vector中后，一般情况下β-半乳糖苷酶的表达将受到破坏，重组克隆体在含有X-Gal、IPTG、Amp的LB固体培养基上培养时将显示白色菌落。但有时比较短的DNA片段插入载体时，基因的读码框有可能正好与LacZ的读码框相吻合，克隆体也会显示蓝色菌落。

5、阳性对照
为了确认实验操作的正确性，以及实验试剂的有效性，我们建议使用本试剂盒中配备的Control Insert(750 bp)进行阳性对照实验。

使用方法：

1、按以下体系配制反应液：

成分	反应体系	对照体系
pUC-T	1μl	1μl
DNA 插入片段	0.1 -0.3 pmol	--
Control Insert DNA	--	1μl
2×Quick Ligation Reaction Buffer	5μl	5μl
Quick T4 DNA Ligase	1μl	1μl
RNase -Free Water	补足至10μl	补足至10μl

注：Insert DNA的使用量：在进行克隆时，Vector DNA和 Insert DNA的摩尔比一般为：1:2-1:10，可根据实验情况选择适当的Vector DNA和 Insert DNA的摩尔数比。Insert DNA的使用量=nmol数×660×Insert DNA bp数。本载体1μl(50ng)的摩尔数约为0.03 pmol。

2、轻轻混合，短暂离心。25℃反应5分钟。
注意：反应时间不要超过15分钟，否则会降低连接效率。
3、反应结束后，将DNA连接产物存放于0-4℃，而后进行转化实验；也可将DNA连接产物置于-20℃保存。
注意：勿进行加热失活反应。
4、将连接产物加入50μl感受态细胞中(将感受态细胞置于冰上融化)，冰浴30分钟。
注意：用化学法转化时，连接产物的加入量不要超过感受态细胞体积的10%。
5、42℃热击45秒钟，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
6、加入450μl无菌SOC或LB培养基，混匀后置于37℃摇床，150 rpm振荡培养45分钟，使菌体复苏。
7、根据实验要求，取适量已转化的感受态细胞，加到含有X-Gal、IPTG和Amp的LB固体培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃，直至液体被吸收后，倒置培养，37℃培养12-16小时。
8、计算白、蓝色菌落，挑选白色菌落，使用PCR法或酶切法鉴定插入片段是否正确。



储存条件：-20℃。

根据您的关注的TA快速连接试剂盒(pUC-T)，您可能还对以下产品有需求：



名称：先锋霉素溶液
货号：BTN120685
规格：1mL
本产品为浓度100mg/mL的先锋霉素水溶液。参考浓度50mg/mL。先锋霉素(7-(2-Thienylacetamido)cephalosporanic acid sodium salt；Cephalotin sodium salt)，分子式：C16H15N2NaO6S2，分子量为：418.42，CAS号：58-71-9，溶于水。头孢菌素类抗生素因有共同的母核——7-氨基头孢烷酸而得名，不同种类的头孢菌素所带侧链不同，而侧链是人工接上的，所以头孢菌素是一种半合成抗生素。之所以又叫“先锋”，那是从“头孢”的原文Ceph=.cefo译音而来。

储存条件：常温运输、4℃避光保存、有效期一年。

名称：NF-κB荧光素酶报告基因质粒
货号：YT451
规格：1μg
NF-κB报告基因质粒是用于检测NFκB转录活性水平的报告基因质粒。NF-κB质粒是以pGL6质粒为模板，在其多克隆位点插入了多个NFκB结合位点，可以高灵敏度地检测NFκB的激活水平。

pGL6质粒是用于在哺乳动物细胞中进行萤火虫萤光素酶报告基因检测的新一代质粒。该报告基因质粒比Promega公司的pGL3系列有了的改进，一方面对于luciferase的编码进行了改进，确保能更好地在哺乳动物细胞中进行表达，同时对整个质粒中所有可以被预测出的可能的转录因子结合位点全部进行了适当的突变处理，在保持原有功能不变的情况下，使各种转录因子在质粒上的非特异性结合降到zuì低。

NF-κB质粒的主要信息如下：

base pairs	5610
NFκB response element (κB)	26-65
luc2 reporter gene	111-1763
SV40 late poly(A) signal	1798-2019
SV40 early enhancer/promoter	2067-2485
Synthetic neomycin phosphotransferase
(Neor) coding region	2510-3304
Synthetic poly(A) signal	3329-3377
Reporter Vector primer 4 (RVprimer4) binding region	3444-3463
ColE1-derived plasmid replication origin	3701
Synthetic Beta-lactamase (Ampr) coding region	4492-5352
Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site	5457-5610
Reporter Vector primer 3 (RVprimer3) binding region	5559-5578

NF-κB质粒的图谱如下：


使用说明：
1. 次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2. NF-κB质粒可以用常规的细胞转染方法转染细胞。检测时可以采用萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(YT271)或双萤光素酶报告基因检测试剂盒（YT273）。
3. TNF-α、IL-1β和LPS等是常见的可以激活NFκB的试剂，可以用作NF-κB报告基因检测时的阳性对照。

储存条件：-20℃。

关注TA快速连接试剂盒(pUC-T)，的同时，为您推荐更多您可能感兴趣的产品：

货号	名称	规格
BTN130806	pression/BTN130806.html" target="_blank">胚胎裂解液	1mL
BTN60107	pression/BTN60107.html" target="_blank">DNA粘转平试剂盒	20次
BTN140378	pression/BTN140378.html" target="_blank">大肠杆菌BL21-CondonPlus(DE3)-RIPL化学感受态细胞	10*100μl
BTN140576	pression/BTN140576.html" target="_blank">大肠杆菌DH10Bac化学感受态细胞	0.1mL*10
BTN120520	pression/BTN120520.html" target="_blank">大肠杆菌OrigamiB(DE3)化学感受态细胞	10*100μl
BTN130559	pression/BTN130559.html" target="_blank">大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)感受态细胞	0.1mL*10

如果您觉得“WE0249 TA快速连接试剂盒(pUC-T)”描述资料不够齐全，请联系我们获取详细资料。(联系时请告诉我从给览网看到的，我们将给您最大优惠！)
本页链接：http://www.geilan.com/com_bjbiolab01/sell/itemid-8578088.html
已经有942位访客查看了本页.